Федеральное государственное бюджетное учреждение науки
Эксперименты проводились на 108 белых
беспородных крысах массой от 250 до 350 г. С целью создания модели
хронического гепатита (ХГ) крысам в
течение 5 недель было выполнено 20 подкожных инъекций по 0,1 мл 66% раствора
четыреххлористого углерода в растительном масле на 100 г массы тела. Все
манипуляции с животными начинали проводить через сутки после окончания введения
CCl4.
Все животные были разбиты на 3 группы: I-я - 38 крыс с индуцированным хроническим гепатитом служила контролем течения патологического процесса, II -я - 36 животных с ХГ, которым была выполнена частичная гепатэктомия в объеме 50%, III - 35 крыс с ХГ, которым во время операции интраперитонеально вводился перфторан (ПФ) из расчета 0,1 мл. на 100г. массы тела. Операцию проводили под эфирным масочным наркозом. Для гистологического исследования брались кусочки печени после забоя. На срезах, окрашенных по Ван-Гизон, при увеличении 10´1,25´40 определяли объемную плотность соединительнотканных волокнистых структур. Содержание коллагеновых белков оценивали по количеству гидроксипролина (ГОП), определяемого в сухой обезжиренной печени после гидролиза в 6Н HCl методом I. Bergman, R. Loxsley в модификации А. А. Косых. Гидроксипролин является специфичной для коллагена аминокислотой. Данный метод позволяет получить специфическое окрашивание при взаимодействии гидроксипролина с парадиметиламинобензальдегидом в кислой среде в присутствии окислителя- хлорамина Б и изопропилового спирта. Интенсивность окрашивания оценивали спектрофотометрически.
Результаты.
Уровень ГОП на высоте патологии составил 2,63±0,26 мг/г. У крыс I- группы ко 2-м суткам его содержание было выше нормы на 10% (норма 1,94±0,019мг/г), к 3-м суткам наблюдалось его снижение до 1,56±0,21мг/г.. На 7-е сутки уровень ГОП составил 1,26±0,17 мг/г, а к
30 суткам незначительно превысил норму и составил 2,13±0,19 мг/г
(на 8%).
Во II-группе (ХГ+РЕЗ) ко 2-м суткам содержание гидроксипролина было на 18% меньше нормы. На 3-и и 7-е сутки достоверных изменений, по сравнению с предыдущим сроком, не было. К 30-м суткам содержание ГОП составило 2,17±0,41мг/г.(Рис.1)
В III группе (ХГ+РЕЗ+ПФ) ко 2-м суткам содержание гидроксипролина было ниже нормы и составило 1,62±0,22мг/г, к 3-м и
7-м суткам уровень ГОП снизился до 1,25±0,38 1,34±0,12 соответственно. К 30-м суткам уровень ГОП был достоверно ниже нормы 1,62±0,15мг/г (Рис.1).
При исследовании объемной плотности (ОП) волокнистых структур получена следующая динамика:
Величина объемной плотности на высоте патологии составила 0,192±0,023 усл.ед. при норме 0,109±0,015 усл.ед.. У крыс I- группы на протяжении всех сроков наблюдения достоверно различимых колебаний ОП не было, и к 30-м суткам данный показатель был достоверно выше нормальных величин в 2 раза. (Рис.2)
Рис. 2.
Во II-группе (ХГ+РЕЗ) ко 2-м суткам произошло достоверное снижение ОП до 0,125±0,015 усл.ед. На 3-и и 7-е ОП была несколько выше предыдущего срока наблюдения. К 30-м суткам объемная плотность волокнистых структур была достоверно ниже нормы 0,067±0,018 усл.ед.
В III группе (ХГ+РЕЗ+ПФ) происходило постепенное снижение ОП с достоверно более низкими показателями на 7-е сутки, и к 30-м суткам ОП составила 0,098±0,013 усл.ед. (Рис.2)
Выводы:
Таким образом, в группе с резекцией определяется обратная корреляция между показателями: гидроксипролин - объемная плотность волокнистых структур. В 1-й и 3-й группах определяется примерно сходная посуточная динамика, но при этом в 1-й группе ОП достоверно выше во все сроки наблюдения по сравнению с нормой. В группе с введением перфторана наблюдалась прямая зависимость между исследуемыми показателями, которые на ранних этапах были ниже нормы с нормализацией к 30-м суткам. Это свидетельствует о том, что под влиянием перфторана происходит снижение количества соединительнотканных волокон и основного белка соединительной ткани. А также перфторан препятствует десинергизации и десинхронизации взаимодействий клеточных ансамблей и затяжному течению восстановительного процесса (1, 2), что отмечается у животных, которым проводилась резекция без введения препарата.
Список литературы
1. Лечение печеночной недостаточности методами трансплантации и экстракорпорального подключения печени и других тканей (биологические и клинические аспекты) // Под ред. В.И. Шумакова и Н.А. Онищенко. - М., 1994. - 142 с.
2. Маянский Д.Н. Роль стромы печени в патогенезе гепатитов // Вестн. АМН СССР. - 1988. - ? 5. - c. 81-88.
Все животные были разбиты на 3 группы: I-я - 38 крыс с индуцированным хроническим гепатитом служила контролем течения патологического процесса, II -я - 36 животных с ХГ, которым была выполнена частичная гепатэктомия в объеме 50%, III - 35 крыс с ХГ, которым во время операции интраперитонеально вводился перфторан (ПФ) из расчета 0,1 мл. на 100г. массы тела. Операцию проводили под эфирным масочным наркозом. Для гистологического исследования брались кусочки печени после забоя. На срезах, окрашенных по Ван-Гизон, при увеличении 10´1,25´40 определяли объемную плотность соединительнотканных волокнистых структур. Содержание коллагеновых белков оценивали по количеству гидроксипролина (ГОП), определяемого в сухой обезжиренной печени после гидролиза в 6Н HCl методом I. Bergman, R. Loxsley в модификации А. А. Косых. Гидроксипролин является специфичной для коллагена аминокислотой. Данный метод позволяет получить специфическое окрашивание при взаимодействии гидроксипролина с парадиметиламинобензальдегидом в кислой среде в присутствии окислителя- хлорамина Б и изопропилового спирта. Интенсивность окрашивания оценивали спектрофотометрически.
Результаты.
Уровень ГОП на высоте патологии составил 2,63±0,26 мг/г. У крыс I- группы ко 2-м суткам его содержание было выше нормы на 10% (норма 1,94±0,019мг/г), к 3-м суткам наблюдалось его снижение до 1,56±0,21мг/г.. На 7-е сутки уровень ГОП составил 1,26±0,17 мг/г, а к
30 суткам незначительно превысил норму и составил 2,13±0,19 мг/г
(на 8%).
Во II-группе (ХГ+РЕЗ) ко 2-м суткам содержание гидроксипролина было на 18% меньше нормы. На 3-и и 7-е сутки достоверных изменений, по сравнению с предыдущим сроком, не было. К 30-м суткам содержание ГОП составило 2,17±0,41мг/г.(Рис.1)
В III группе (ХГ+РЕЗ+ПФ) ко 2-м суткам содержание гидроксипролина было ниже нормы и составило 1,62±0,22мг/г, к 3-м и
7-м суткам уровень ГОП снизился до 1,25±0,38 1,34±0,12 соответственно. К 30-м суткам уровень ГОП был достоверно ниже нормы 1,62±0,15мг/г (Рис.1).
При исследовании объемной плотности (ОП) волокнистых структур получена следующая динамика:
Величина объемной плотности на высоте патологии составила 0,192±0,023 усл.ед. при норме 0,109±0,015 усл.ед.. У крыс I- группы на протяжении всех сроков наблюдения достоверно различимых колебаний ОП не было, и к 30-м суткам данный показатель был достоверно выше нормальных величин в 2 раза. (Рис.2)
Рис. 2.
Во II-группе (ХГ+РЕЗ) ко 2-м суткам произошло достоверное снижение ОП до 0,125±0,015 усл.ед. На 3-и и 7-е ОП была несколько выше предыдущего срока наблюдения. К 30-м суткам объемная плотность волокнистых структур была достоверно ниже нормы 0,067±0,018 усл.ед.
В III группе (ХГ+РЕЗ+ПФ) происходило постепенное снижение ОП с достоверно более низкими показателями на 7-е сутки, и к 30-м суткам ОП составила 0,098±0,013 усл.ед. (Рис.2)
Выводы:
Таким образом, в группе с резекцией определяется обратная корреляция между показателями: гидроксипролин - объемная плотность волокнистых структур. В 1-й и 3-й группах определяется примерно сходная посуточная динамика, но при этом в 1-й группе ОП достоверно выше во все сроки наблюдения по сравнению с нормой. В группе с введением перфторана наблюдалась прямая зависимость между исследуемыми показателями, которые на ранних этапах были ниже нормы с нормализацией к 30-м суткам. Это свидетельствует о том, что под влиянием перфторана происходит снижение количества соединительнотканных волокон и основного белка соединительной ткани. А также перфторан препятствует десинергизации и десинхронизации взаимодействий клеточных ансамблей и затяжному течению восстановительного процесса (1, 2), что отмечается у животных, которым проводилась резекция без введения препарата.
Список литературы
1. Лечение печеночной недостаточности методами трансплантации и экстракорпорального подключения печени и других тканей (биологические и клинические аспекты) // Под ред. В.И. Шумакова и Н.А. Онищенко. - М., 1994. - 142 с.
2. Маянский Д.Н. Роль стромы печени в патогенезе гепатитов // Вестн. АМН СССР. - 1988. - ? 5. - c. 81-88.
