Федеральное государственное бюджетное учреждение науки
Идея селективного воздействия фармакологических средств на очаги неспецифического воспаления была актуальна всегда, но приблизиться к еe разрешению удалось лишь в настоящее время благодаря разработке и внедрению в клиническую практику методов направленного транспорта фармакологических препаратов.
Лохвицким В.Г. (1992 г) была предложена методика транспорта антибиотиков на аутоцитовзвеси, полученной методом фракционирования цельной крови и ресуспендированной физиологическим раствором NaCl и термостатированной при +37С. Нами была предложена модификация этой методики, в которой вместо инкубации в термостате проводили предварительную обработку деплазмированной цитовзвеси гелий-неоновым лазером (мощность излучения 3 мВт, экспозиция 3 минуты в режиме перемешивания), что позволило увеличить эффективность фиксации антибиотика клетками крови, подтвержденую бактериологически.
Для доказательства проникновения антибактериального препарата к очагу воспаления Лохвицким В.Г. были проведены исследования по определению антибактериального препарата методом диффузии в агар. С той же целью нами был использован спектрофотометрический метод количественного определения в крови пациентов с очагами неспецифического воспаления абактала (антибактериального препарата из группы фторхинолонов), разработанный в судебно-медицинской лаборатории Центральной Медико-санитарной части N 122 (г Санкт-Петербург).
1. Материал и методы исследования
Было выполнено три серии экспериментов. Первая включала в себя определение концентрации абактала в крови пациентов (n=10), страдавших обострением хронического холецистита, отобранных и подготовленных для проведения оперативного вмешательства. Объектом исследования была венозная кровь (лейкоцитоз периферической крови составил 18,0?1,8*109/л, лейкоцитарный индекс интоксикации - 23,0?2,5 у.е.). Пять мл венозной крови, гемостатированной 3,8% цитратом натрия в соотношении 1 : 4, центрифугировали при 2500 об/мин, плазму удаляли, и цитовзвесь ресуспендировали физиологическим раствором NaCl. В зависимости от условий эксперимента в цитовзвесь добавляли 0,005 мл 1% раствора АТФ. После чего клетки крови гемолизировали дистиллированной водой, гемоглобин осаждали химическим путем, переводя в нерастворимое состояние, фильтровали и исследовали.
Концентрацию абактала определяли в средах, обработанных в течении 3 мин в различных оптических режимах: гелий-неоновый лазер (ГНЛ) - аппарат "Тулон", длина волны 633,3 нм, мощность 3 мВт, инфракрасный полупроводник (ИКП) - аппарат "Рубин", длина волны 840 нм, мощность 30 мВт, средневолновой и длинноволновой ультрафиолетовое излучение (УФИ): аппарат ОВК 3-04, воздействие на взвесь клеток производили при помощи световода, помещенного внутрь пробирки, при помощи термостатирования (температура +37С), а также ряд проб засвечивали широкополосным спектром дневного света в присутствии АТФ и без нее (Табл. 1). Вторая серия экспериментов была посвящена изучению влияния дозы оптического излучения гелий-неонового лазера на концентрацию абактала, который может удержать фиксированное количество клеток-носителей. Абсолютное количество лейкоцитов в исследуемых образцах (n=8) составило 2,0?1,2 * 10 9.
С этой целью в гемакон ГК 500/300 забирали 400 мл цельной крови, ее центрифугировали, плазму удаляли, оставшуются цитовзвесь ресуспендировали физиологическим раствором хлорида натрия в объеме, равном количеству удаленной плазмы. Деплазмированную цитовзвесь облучали гелий-неоновым лазером при одинаковой интенсивности излучения, но с различным временем экспозиции (от 1 до 8 минут) (Рис. 1). Третья серия экспериментов предусматривала определение количества абактала в тканях удаленного желчного пузыря пациентов с обострением хронического холецистита, подвергшихся холецистэктомии. Основную группу составили 9 пациентов, которым за 24 часа до операции был проведен направленный транспорт 400 мг абактала. В группу сравнения вошли 8 пациентов, которым за 24 часа до операции была введена такая же доза абактала путем внутривенной инфузии. По полу, возрасту, весу, клиническим и биохимическим показателям обе группы существенно не различались.
2. Результаты и обсуждение
При исследовании различных условий инкубации и режимов оптического воздействия на клетки-носители были получены следующие результаты.
Таблица-1.
Количество абактала, фиксированное цельной кровью и цитовзвесью, в зависимости от условий инкубации
* - р<0,05, различие с контролем достоверно
** - р<0,01
Максимальная концентрация абактала была обнаружена в пробе, подвергшейся воздействию гелий-неонового лазера перед введением абактала и АТФ, причем эти показатели были выше, чем в среде, в которой обработка ГНЛ была проведена после добавления антибиотика. Однако, различия между группами не носили достоверного характера.
По сравнению с другими пробами, максимальная концентрация поглощенного абактала была обнаружена в среде, обработанной ГНЛ перед введением антибиотика в присутствии АТФ, причем различия были достоверны. Полученные данные могут свидетельствовать с одной стороны как о недостаточной фиксации препарата клеткой без оптической обработки ГНЛ, с другой стороны о возможной десорбции абактала с поверхности клетки-носителя после ее облучения.
При изучении зависимости степени фиксации абактала клетками-носителями от длительности облучения цитовзвеси светом гелий-неонового лазера (мощность 3 мВт, режим перемешивания) были получены следующие результаты (Рис. 1).
Рисунок 1.
Зависимость количества антибактериального препарата абактал, фиксированного цитовзвесью, от времени экспозиции гелий-неонового лазера
Было установлено, что максимальное поглощение абактала клетками-носителями наблюдалось при 3 минутах экспозиции. Это время было признано оптимальным для проведения направленного транспорта антибиотика.
При исследовании количества абактала, поступившего в очаг неспецифического воспаления (желчный пузырь) были получены следующие результаты (Табл. 2).
Таблица 2
Концентрация абактала в ткани желчного пузыря
Из приведенной таблицы следует, что количество абактала, рассчитанного на 1 г ткани желчного пузыря пациентов, получивших направленный транспорт, в 1,6 раза превышает показатели группы сравнения (р<0,01). Таким образом, проведено исследование, по изучению влияния различных режимов оптического воздействия на фиксацию абактала клетками крови. Выявлен оптимальный метод воздействия (гелий неоновый лазер) и время воздействия (3 минуты). Количество абактала непосредственно в очаге воспаления при проведении направленного транспорта его было в очаге воспаления в 1,6 раза больше, чем при традиционном внутривенном пути введения.
ВЫВОДЫ:
1. Облучение гелий-неоновым лазером цитовзвеси с целью оптимизации фиксации абактала относительно других методов оптического воздействия и термостатирования является оптимальным (в течении 3 минут при мощности излучателя 3 мВт). 2. При проведении направленного транспорта абактала его количество в очаге неспецифического воспаления в 1,6 раза выше, чем при традиционном внутривенном пути введения 3. Применение направленного транспорта абактала не изменяет его терапевтическую дозу, но увеличивает эффективность антибактериальной терапии
Список литературы
1) Лохвицкий С.В., Гуляев А.Е., Зубцов Н.В. и др. Клиническая фармакокинетика антибиотиков при введении их в клеточной массе во время плазмафереза // Здравоохр. Казахстана.- 1992.- N 8. - С.22-24.
2) Лохвицкий С.В., Кивман Г.Я., Гуляев А.Е., Пьянов С.Г., Губенко Л.В., Зубцов В.Н. Способ лечения хирургической инфекции. АС SU 1805390 А1.
3) Бельских А.Н., Потапчук В.Б. Совместное применение антибиотиков и экстракорпоральных методов детоксикации в гнойно-септической хирургии // Сб. трудов 9-го ежегодного Санкт-Петербургского нефрологического семинара. - СПб., ТНА, 2001
4) Ержанов О.Н., Швецов Д.А., Даниярова Б.А. Введение антибиотиков в клеточной взвеси крови при плазмаферезе в лечении острых абсцессов лeгких, осложнeнных пиопневмотораксом. // Тр. 3-го Рос. нац. конгресса "Человек и лекарство" - М., 1996. - С. 116.
5) Кузин В.Б., Борисов В.И., Прозорова В.К., Шалунов А.А. Введение в теорию фармакотерапии. Нижний Новгород, Издательство НГМА, 2002 г
Лохвицким В.Г. (1992 г) была предложена методика транспорта антибиотиков на аутоцитовзвеси, полученной методом фракционирования цельной крови и ресуспендированной физиологическим раствором NaCl и термостатированной при +37С. Нами была предложена модификация этой методики, в которой вместо инкубации в термостате проводили предварительную обработку деплазмированной цитовзвеси гелий-неоновым лазером (мощность излучения 3 мВт, экспозиция 3 минуты в режиме перемешивания), что позволило увеличить эффективность фиксации антибиотика клетками крови, подтвержденую бактериологически.
Для доказательства проникновения антибактериального препарата к очагу воспаления Лохвицким В.Г. были проведены исследования по определению антибактериального препарата методом диффузии в агар. С той же целью нами был использован спектрофотометрический метод количественного определения в крови пациентов с очагами неспецифического воспаления абактала (антибактериального препарата из группы фторхинолонов), разработанный в судебно-медицинской лаборатории Центральной Медико-санитарной части N 122 (г Санкт-Петербург).
1. Материал и методы исследования
Было выполнено три серии экспериментов. Первая включала в себя определение концентрации абактала в крови пациентов (n=10), страдавших обострением хронического холецистита, отобранных и подготовленных для проведения оперативного вмешательства. Объектом исследования была венозная кровь (лейкоцитоз периферической крови составил 18,0?1,8*109/л, лейкоцитарный индекс интоксикации - 23,0?2,5 у.е.). Пять мл венозной крови, гемостатированной 3,8% цитратом натрия в соотношении 1 : 4, центрифугировали при 2500 об/мин, плазму удаляли, и цитовзвесь ресуспендировали физиологическим раствором NaCl. В зависимости от условий эксперимента в цитовзвесь добавляли 0,005 мл 1% раствора АТФ. После чего клетки крови гемолизировали дистиллированной водой, гемоглобин осаждали химическим путем, переводя в нерастворимое состояние, фильтровали и исследовали.
Концентрацию абактала определяли в средах, обработанных в течении 3 мин в различных оптических режимах: гелий-неоновый лазер (ГНЛ) - аппарат "Тулон", длина волны 633,3 нм, мощность 3 мВт, инфракрасный полупроводник (ИКП) - аппарат "Рубин", длина волны 840 нм, мощность 30 мВт, средневолновой и длинноволновой ультрафиолетовое излучение (УФИ): аппарат ОВК 3-04, воздействие на взвесь клеток производили при помощи световода, помещенного внутрь пробирки, при помощи термостатирования (температура +37С), а также ряд проб засвечивали широкополосным спектром дневного света в присутствии АТФ и без нее (Табл. 1). Вторая серия экспериментов была посвящена изучению влияния дозы оптического излучения гелий-неонового лазера на концентрацию абактала, который может удержать фиксированное количество клеток-носителей. Абсолютное количество лейкоцитов в исследуемых образцах (n=8) составило 2,0?1,2 * 10 9.
С этой целью в гемакон ГК 500/300 забирали 400 мл цельной крови, ее центрифугировали, плазму удаляли, оставшуются цитовзвесь ресуспендировали физиологическим раствором хлорида натрия в объеме, равном количеству удаленной плазмы. Деплазмированную цитовзвесь облучали гелий-неоновым лазером при одинаковой интенсивности излучения, но с различным временем экспозиции (от 1 до 8 минут) (Рис. 1). Третья серия экспериментов предусматривала определение количества абактала в тканях удаленного желчного пузыря пациентов с обострением хронического холецистита, подвергшихся холецистэктомии. Основную группу составили 9 пациентов, которым за 24 часа до операции был проведен направленный транспорт 400 мг абактала. В группу сравнения вошли 8 пациентов, которым за 24 часа до операции была введена такая же доза абактала путем внутривенной инфузии. По полу, возрасту, весу, клиническим и биохимическим показателям обе группы существенно не различались.
2. Результаты и обсуждение
При исследовании различных условий инкубации и режимов оптического воздействия на клетки-носители были получены следующие результаты.
Таблица-1.
Количество абактала, фиксированное цельной кровью и цитовзвесью, в зависимости от условий инкубации
| N пробы | Наименование среды | Условие инкубации | Количество абактала, мкг/мл (n=10) |
| 1 | Контроль (абактал + физиологический раствор NaCl) | - | 2,80?0,08 |
| 2 | Цельная кровь | Термостат + АТФ | 1,91?0,16* |
| 3 | ГНЛ + АТФ | 2,09?0,18* | |
| 4 | Термостат | 1,54?0,10** | |
| 5 | ГНЛ | 1,98?0,08* | |
| 6 | Цитовзвесь | Термостат + АТФ | 2,38?0,18 |
| 7 | ГНЛ перед введением антибиотика + АТФ | 2,71?0,23 | |
| 8 | ГНЛ после введения антибиотика + АТФ | 2,32?0,31 | |
| 9 | ГНЛ | 2,42?0,28 | |
| 10 | ИКП + АТФ | 2,02?0,24* | |
| 11 | ИКП | 2,01?0,19* | |
| 12 | Дневной свет + АТФ | 1,63?0,09** | |
| 13 | УФИ - средневолновой ультрафиолет + АТФ | 2,03?0,18* | |
| 14 | УФИ - длинноволновой ультрафиолет + АТФ | 2,06?0,23* |
* - р<0,05, различие с контролем достоверно
** - р<0,01
Максимальная концентрация абактала была обнаружена в пробе, подвергшейся воздействию гелий-неонового лазера перед введением абактала и АТФ, причем эти показатели были выше, чем в среде, в которой обработка ГНЛ была проведена после добавления антибиотика. Однако, различия между группами не носили достоверного характера.
По сравнению с другими пробами, максимальная концентрация поглощенного абактала была обнаружена в среде, обработанной ГНЛ перед введением антибиотика в присутствии АТФ, причем различия были достоверны. Полученные данные могут свидетельствовать с одной стороны как о недостаточной фиксации препарата клеткой без оптической обработки ГНЛ, с другой стороны о возможной десорбции абактала с поверхности клетки-носителя после ее облучения.
При изучении зависимости степени фиксации абактала клетками-носителями от длительности облучения цитовзвеси светом гелий-неонового лазера (мощность 3 мВт, режим перемешивания) были получены следующие результаты (Рис. 1).
Рисунок 1.
Зависимость количества антибактериального препарата абактал, фиксированного цитовзвесью, от времени экспозиции гелий-неонового лазера
Было установлено, что максимальное поглощение абактала клетками-носителями наблюдалось при 3 минутах экспозиции. Это время было признано оптимальным для проведения направленного транспорта антибиотика.
При исследовании количества абактала, поступившего в очаг неспецифического воспаления (желчный пузырь) были получены следующие результаты (Табл. 2).
Таблица 2
Концентрация абактала в ткани желчного пузыря
| Показатель | Группа сравнения | Основная группа |
| 1. Средняя масса органа | 10,9?2,0 | 11,0?2,3 |
| 2.Концентрация абактала, полученная в результате измерений (мкг/г) | 1,45?0,78 | 2,46?0,96* |
| 2. Расчетное количество абактала на целый орган (мкг) | 15,95?2,13 | 24,64?2,67* |
| 3. % от общей введенной дозы абактала (400 мг) | 3,75% | 6,25% |
Из приведенной таблицы следует, что количество абактала, рассчитанного на 1 г ткани желчного пузыря пациентов, получивших направленный транспорт, в 1,6 раза превышает показатели группы сравнения (р<0,01). Таким образом, проведено исследование, по изучению влияния различных режимов оптического воздействия на фиксацию абактала клетками крови. Выявлен оптимальный метод воздействия (гелий неоновый лазер) и время воздействия (3 минуты). Количество абактала непосредственно в очаге воспаления при проведении направленного транспорта его было в очаге воспаления в 1,6 раза больше, чем при традиционном внутривенном пути введения.
ВЫВОДЫ:
1. Облучение гелий-неоновым лазером цитовзвеси с целью оптимизации фиксации абактала относительно других методов оптического воздействия и термостатирования является оптимальным (в течении 3 минут при мощности излучателя 3 мВт). 2. При проведении направленного транспорта абактала его количество в очаге неспецифического воспаления в 1,6 раза выше, чем при традиционном внутривенном пути введения 3. Применение направленного транспорта абактала не изменяет его терапевтическую дозу, но увеличивает эффективность антибактериальной терапии
Список литературы
1) Лохвицкий С.В., Гуляев А.Е., Зубцов Н.В. и др. Клиническая фармакокинетика антибиотиков при введении их в клеточной массе во время плазмафереза // Здравоохр. Казахстана.- 1992.- N 8. - С.22-24.
2) Лохвицкий С.В., Кивман Г.Я., Гуляев А.Е., Пьянов С.Г., Губенко Л.В., Зубцов В.Н. Способ лечения хирургической инфекции. АС SU 1805390 А1.
3) Бельских А.Н., Потапчук В.Б. Совместное применение антибиотиков и экстракорпоральных методов детоксикации в гнойно-септической хирургии // Сб. трудов 9-го ежегодного Санкт-Петербургского нефрологического семинара. - СПб., ТНА, 2001
4) Ержанов О.Н., Швецов Д.А., Даниярова Б.А. Введение антибиотиков в клеточной взвеси крови при плазмаферезе в лечении острых абсцессов лeгких, осложнeнных пиопневмотораксом. // Тр. 3-го Рос. нац. конгресса "Человек и лекарство" - М., 1996. - С. 116.
5) Кузин В.Б., Борисов В.И., Прозорова В.К., Шалунов А.А. Введение в теорию фармакотерапии. Нижний Новгород, Издательство НГМА, 2002 г
