Исследование эффективности 5-ти компонетной антиоксидантной рецептуры при отравлениях амитриптилином средней степени тяжести у крыс

В опытах на крыс проведена оценка влияния 5-ти компонентной антиоксидантной рецептуры на показатели антиоксидантной активность, свободнорадикального окисления сыворотки крови, скорость восстановления физической работоспособности и условно-рефлекторной деятельности при отравлениях амитриптилином средней степени тяжести. Показано, что раннее применение комплекса антиоксидантов улучшает функциональное состояние отравленных животных.

Ключевые слова: антиоксидант, амитриптилин, реабилитация, острое отравление.

ВВЕДЕНИЕ

В последние годы отмечается существенный рост количества острых пероральных отравлений. По данным кафедры ВПТ ВМедА в структуре отравлений преобладают интоксикации нейротропными ядами - 71%, из которых 59% приходится на препараты снотворно-гипнотического и психодислептического действия. При сохраняющейся высокой летальности интоксикаций тяжелой и крайне тяжелой степеней тяжести (около 15%), основную массу клинических случаев (около 65%) составляют отравления легкой и средней степеней тяжести.

Интоксикации вышеуказанными ксенобиотиками характеризуются в первую очередь поражением центральной нервной системы, которое клинически проявляется угнетением ее функции и нарушением двигательной активности [7].

В результате многолетних исследований были разработаны патогенетическая и этиотропная терапия интоксикаций нейротоксикантами, включающая обширный арсенал антидотных препаратов, методы ускоренного удаления яда и др. [1, 4]. Это позволяет в значительной степени сократить длительность токсикогенной фазы отравления и улучшить прогноз при тяжелых интоксикациях. Однако в доступной литературе встречаются лишь единичные публикации, посвященные изучению функционального состояния организма при нетяжелых отравлениях нейротропными ядами в соматогенной стадии интоксикации [1, 7].

В целом, на данный момент, сведения об изменении функционального состояния организма и сроках его восстановления при интоксикациях вышеуказанными ядами средней степеней тяжести весьма ограничены. Это свидетельствует о необходимости определения показаний и алгоритма проведения реабилитационных мероприятий при данных отравлениях, а также оценке перспективности использования при их проведении средств, обладающих антиоксидантной активностью.

Проведенное нами исследование посвящено изучению процессов восстановления условно-рефлекторной деятельности, толерантности к физической нагрузке, а также показателей свободнорадикального окисления и активности антиоксидантной системы при отравлениях амитриптилином средней степени тяжести, а так же возможности использования комплекса антиоксидантов в качестве средства ранней реабилитации при этих интоксикациях.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследования были выполнены на 60 белых беспородных крысах-самках массой 150-180 г. Животные содержались в стандартных условиях вивария. За 24 часа до опытов кормление животных, находившихся на свободном водном режиме, прекращали.

Для моделирования отравлений средней степени тяжести амитриптилин вводился однократно интроперитонеально в дозе 2/3 ЛД₅₀ (ЛД₅₀ - 99+/-17,3 мг/кг).

В состав антиоксидантного комплекса (АОК-5) входили: витамин Е, А и селенит натрия, которые вводились внутрижелудочно в дозах 20, 7,0 и 0,1 мг/кг соответственно, витамин. С - 20 мг/кг и унитиол - 50 мг/кг применялись внутрибрюшинно [3]. АОК-5 вводили через 2 часа после затравки один раз в сутки в течении первых трех дней, контрольной группе инъецировали аналогичные дозы физиологического раствора.

Толерантность к физической нагрузке оценивалась по работе выполненной животным при беге на третбане (после предварительного обучения) [2]. Критерием утомления являлся момент отказа животного продолжать бег, несмотря на электрическую стимуляцию. За сутки до затравки регистрировали фоновые значения, в дальнейшем показатель оценивался в динамике на 1-е, 3-и, и 5-е сутки в процентах от исходных показателей.

Условно-рефлекторная деятельность оценивалась по стандартной методике активного избегания плаванием. У лабораторных животных предварительно вырабатывался условный рефлекс, заключавшийся в отработке навыка выхода из воды на "сушу". Регистрировалось время выхода до интоксикации, а также на 1-е, 3-и, и 5-е сутки после введения яда. Преимуществом данного метода является возможность его использования даже на малоподвижных животных, а так же позволяет дифференцировать влияние общей астении от более специфических нарушений обучения и памяти [6].

Определение показателей свободнорадикального окисления и активности антиоксидантной системы проводилось по интенсивности индуцированной биохемилюминисценции, позволяющей, с одной стороны, оценивать интенсивность генерации продуктов ПОЛ, общую активность радикальных окислительных процессов и антиокислительную активность биосубстратов, а с другой стороны - при необходимости специфично идентифицировать отдельные звенья изучаемых систем.

Метод индуцирования биохемилюминесценции гидроперекисью третичного бутила или перекисью водорода основан на каталитическом разложении перекиси ионами двухвалентного железа и образовании при этом свободных радикалов (реакция Фентона) [5]. Интенсивность свободнорадикального процесса определяется по сумме энергии, выделяющейся в виде света в ходе реакции в течение минуты и более после инициации процесса. Определение индуцированной биохемилюминисценции в плазме крови проводили с помощью биохемилюминометра БХЛ-06 (Россия). В модельную систему входили - 2 % раствор перекиси водорода и 0,05 mM раствор сульфата железа.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

При затравке амитриптилином лабораторных животных в указанной дозе отмечалось угнетение функций ЦНС, проявившееся в принятии животными лежачего (распластанного) положения при сохранении самостоятельных движений, отсутствием реакции на пищевой раздражитель, ослаблением рефлекса переворачивания, угнетением болевой чувствительности. На вторые сутки у животных наблюдалось увеличение двигательной активности по сравнению с исходными значениями, а на третьи этот показатель не превышал нормальные величины.

При изучении свободнорадикального окисления было установлено, что в течении всего периода наблюдения этот показатель был выше, чем нормальные значения, как в контрольной, так и в опытной группах (Рис.1). На 1-3 сутки свободнорадикальное окисление у животных, получавших комплекс антиоксидантов, было достоверно ниже, чем в контроле, а к 5-ым различий между группами не наблюдалось.

В свою очередь антиоксидантная активность в опытной и контрольной группе в течении всего периода наблюдения была достоверно ниже, чем нормальные значения (Рис.2) и достигала своего минимума на 3-и сутки, а в дальнейшем несколько повышалась. Следует так же отметить, что применение АОК-5 практически не влияло на антиоксидантную активность (различие между группами не достоверно).

При исследовании условно-рефлекторной было установлено, что на 1-е сутки после затравки ее нарушения были наиболее выражены (Рис.3). Так, время латентного периода (выхода на "сушу") в контрольной и опытной группах были в 3,7 и 2,7 раза соответственно выше, чем исходные значения и достоверно различались между собой (р<0,05). Нормализация исследуемого показателя была зарегистрирована на 3-и сутки эксперимента.

На первые сутки после затравки отмечалось достоверное снижение (р<0,05) толерантности к физической нагрузке в контрольной и опытной группах в 3,3 и 2,1 раза соответственно по сравнению с исходными значениями (Рис.4). Различия между группами также носили достоверный характер (р<0,05). На 3-и сутки этот показатель был достоверно ниже исходных значений, а статистически значимых различий между группами не выявлялось. К исходу 5-х суток физическая работоспособность в контроле оставалась ниже, зафиксированной до затравки, в то время как в группе получавшей АОК-5 достоверно не отличалась от исходных значений (р<0,05).

Выводы

На основании полученных данных можно говорить о том, что при интоксикации амитриптилином средней степени тяжести, условно-рефлекторная деятельность восстанавливается быстрее, чем физическая работоспособность, а нормализация показателей свободнорадикального окисления и антиоксидантной активности существенно от них отстает. Применение комплекса антиоксидантов, с одной стороны, способствует снижению процессов свободнорадикального окисления, не влияя при этом на антиоксидантную активность, а с другой, ускоряет восстановление физической работоспособности, не влияя на сроки восстановления условно-рефлекторной деятельности.

Рис.1. Динамика интегрального показателя свободнорадикального окисления сыворотки крови животных, затравленных амитриптилином в дозе 2/3ЛД₅₀



Список литературы

1. Аксенов И.В. Применение актопротекторов в комплексном лечении острых экзогенных отравлений карбофосом, дихлорэтаном и этиленгликолем: Автореф. дис. : канд. мед. наук.- СПб., 1996.- 24с.





2. Бобков Ю.Г., Виноградов В.М., Катков В.Ф. // Фармакологическая коррекция утомления. - М.: Медицина, 1994.-208с.





3. Плужников Н.Н., Магира В.Ф. Легеза В.И., Сосюкин А.Е. Экспериментальная оценка противолучевой активности антиоксидантов в условиях их комплексного применения // Матер. Российской науч. конф. "Медицинские аспекты радиационной и химической безопасности", 11-12 октября 2001 г. - СПб.: ВМедА, 2001. - С. 409-410.





4. Лужников Е.А., Костомарова Л.Г. Острые отравления: Руководство для врачей.- М.: Медицина, 2000.- 434 с.





5. Кузьмина Е.И., Нелюбин А.С., Щенникова М.К. Применение индуцированной хемилюминесценции для оценки свободно-радикальных реакций в биологических субстратах. / Межвузовский сборник: Биохимия и биофизика микроорганизмов. - Горький, 1983.- С.179-183.





6. Буреш Я., Бурешова О. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения // пер. с англ.- М.: Высшая школа, 1990.- 378с.





7. Александров М.В. Общие механизмы нейротоксического действия: Автореф. дис. : доктора. мед. наук.- СПб: ВМедА.- 1997.- 28 с.