Влияние экзогенной супероксиддисмутазы на активность супероксиддисмутазы в нейтрофилах и мононуклеарах у больных с острым гепатитом В

Активация процессов свободнорадикального окисления лежат в основе патогенеза многих вирусных заболеваний печени, причем избыточное образование активных форм кислорода (АФК) проявляется на самых ранних стадиях процесса (Нагоев Б. С. и соавт, 2003; Loguercio еt al., 2003). Тяжесть течения и прогноз развития заболеваний печени тесно связаны с функциональным состоянием антиоксидантной системы гепатоцитов (Никитин Е.В. и соавт., 1998). Для окислительного стресса в первую очередь характерно нарушение в соотношении анти- и прооксидантных систем в сторону повышения активности последней. Начальные этапы запуска реакции генерации АФК при различных патологических состояниях могут отличаться, но уже на следующих этапах направленность и интенсивность свободнорадикальных процессов теряют свою специфичность и зависят от состояния и степени мобилизации антиоксидантной защиты (Клебанов Г.И. и соавт., 1999). Среди лекарственных средств, нормализующих уровень АФК и продуктов ПОЛ, особое место принадлежит препаратам СОД - окислительно-восстановительного фермента (КФ 1.15.1.1.), являющегося основным компонентом антиоксидантной защиты всех про- и эукариотических клеток (Чурилова И.В. и соавт., 2002). Целью проводимого исследования явилась оценка влияния экзогенной рекомбинантной супероксиддисмутазы человека на активность эндогенной супероксиддисмутазы в нейтрофилах и мононуклеарах у больных с острым гепатитом В. ХАРАКТЕРИСТИКА ОБСЛЕДОВАННЫХ БОЛЬНЫХ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. Было обследовано 30 пациентов c диагнозом - острый гепатит В. Диагноз был подтвержден наличием HВsAg. Исследования проводились в острый период заболевания. У больных отмечались желтушность, интоксикация различной степени выраженности, увеличение размеров печени, выраженный цитолитический синдром. Первую группу составили 15 больных в возрасте от 17 до 68 лет (8 женщин и 7 мужчин). Данная группа больных получала базисную терапию - инфузии 5% раствора глюкозы, физиологического раствора, солевых растворов, спазмолитиков, витаминов. Во вторую группу вошли 15 пациентов в возрасте от 17 до 60 лет (12 мужчин и 3 женщины). Эта группа пациентов, кроме базисной терапии, прошла курс антиоксидантной терапии препаратом Рексод (производство ООО "Рэсбио" и НПП "Трис"). Препарат вводился внутривенно капельно по 32 мг ежедневно в течении 10 дней. Оценку лечебной эффективности препарата осуществляли согласно регламентированному стандарту условий, обеспечивающих достоверность и сопоставимость результатов, в соответствии с рекомендациями ВОЗ и директивами Фармкомитета МЗ РФ. Всегда имелось заключение этической комиссии и информированное согласие пациентов. Исследование было проведено с соблюдением правил двойного слепого плацебо контролируемого рандомизированного метода. Клетки выделяли из периферической крови по модифицированной методике на фиколл-верографиновом градиенте (Зыбина Н.Н., Лавинская Н.Н., 1994). 8 мл крови забирали в пробирку с 3 мл полиглюкина и 2 каплями гепарина. Кровь отстаивали 60 мин. при температуре 25? С. Для разделения лейкоцитов плазму, обогащенную лейкоцитами, наслаивали на 2 мл среды с градиентом плотности 1.077 и центрифугировали 35 мин. при 1500 об./мин. После центрифугирования удаляли верхний слой плазмы, переносили кольцо клеток с мононуклеарами (лимфоциты и моноциты) и тромбоцитами в чистую пробирку и удаляли оставшийся слой среды. На дне пробирки оставался осадок нейтрофилов и немного эритроцитов. Затем к суспензии мононуклеаров и тромбоцитов добавляли равный объем раствора Версена и центрифугировали 5 мин. при 1000 об/мин. При этом лимфоциты и моноциты оказывались в осадке, а тромбоциты в супернатанте. Осадок мононуклеаров ресуспендировали в 1 мл среды Хенкса и подсчитывали количество клеток. К осадку нейтрофилов с эритроцитами добавляли 2 мл воды и ровно через 30 секунд добавляли 2 мл 1,8% физиологического раствора и перемешивали. Центрифугировали 5 мин. при 1000 об./мин., супернатант сливали, а нейтрофилы ресуспендировали в 1 мл среды Хенкса и подсчитывали количество клеток. Разводили суспензию клеток таким образом, чтобы в 1 мл содержалось 4 миллиона клеток. Активность супероксиддисмутазы в нейтрофилах и мононуклеарах проводили ксантин-ксантиноксидазным методом с использованием реактивов фирмы "RANDOX". Статистическую обработку полученных результатов осуществляли с использованием Т-критерия Вилкоксона. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Анализ данных показал отсутствие достоверных различий исследуемых параметров между двумя группами, до лечения (табл.1), что позволило в дальнейшем оценить влияние препарата Рексод. В результате исследований активности фермента у пациентов до проведения терапии было отмечено, что активность СОД в нейтрофилах и более значительно в мононуклеарах в обеих группах была снижена. Повторно пациенты обследовались после проведенной терапии. При оценке изменения активности фермента было выявлено, что активность СОД в мононуклеарах и нейтрофилах в ходе терапии возросла в обеих группах по отношению к первоначальным значениям. Однако в группе пациентов с базисной терапией эти изменения были не достоверны и активность супероксиддисмутазы не нормализовалась (табл. 1). Таблица 1. Показатели активности СОД в нейтрофилах и мононуклеарах у пациентов с острым гепатитом B в зависимости от проводимой терапии. Наименование параметра Единицы Нормаль- ные значения Группы пациентов I II до лечения (n=15) После лечения (n=15) до лечения (n=15) после лечения (n=15) СОД нейтр. Отн.ед./млн кл. 32,50 (2,50) 27,00(*) (3,70) 30,17 (3,73) 26,95(*) (4,92) 38,58 (v) (5,01) СОД мон. Отн.ед./млн кл. 32,50 (2,50) 21,23(*) (8,10) 26,05 (8,16) 22,70(*) (4,41) 33,53 (v) (5,51) Примечание: первой группе пациентов проводилась базисная терапия; второй кроме базисной проводилась, антиоксидантная терапия препаратом Рексод; (v)- достоверные изменения после проведенной терапии; (*)- различия по сравнению с нормой (Р<0,05) В группе пациентов с терапией рекомбинантным препаратом Рексод, эти значения возросли на 25% (р<0,05) и 33% (р<0,05) больше, чем в группе сравнения соответственно (табл. 1). Таким образом, применение рекомбинантной СОД человека (препарата Рексод) в схеме терапии острого вирусного гепатита В способствовало увеличению активности ключевого фермента антиоксидантной защиты организма (супероксиддисмутазы) в нейтрофилах и мононуклеарах. Сохранение активности СОД в клетках позволит уменьшить эффекты окислительного стресса и повысить устойчивость гепатоцитов к действию свободных радикалов.

Список литературы

1. Дубинина Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состоянии окислительного стресса // Вопр. Мед.химии 2001 т.47 ?6 С.561-58





2. Дроздова Ю.И. Выделение и изучение свойств супероксиддисмутазы человека из рекомбинантного штамма дрожжей Saccharomyces cerevisiae, Автореферат диссертации канд. Биологических наук. С-Петербург 1997 20с.





3. Чурилова И.В., Зиновьев Е.В., Парамонов Б.А., Дроздова Ю.И., Сидельников В.О. Препарат эритроцитарной супероксиддисмутазы "Эрисод": влияние на уровень обожженных в состоянии ожогового шока// Бюлл. экспер. биологии и медицины, 2002, т.134, ? 11, стр.528-531.





4. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах//Биология, Соросовский Образовательный журнал, 2000





5. Loguercio C., Federico A. Oxidative stress in viral and alcoholic hepatitis// Free Radic Biol Med. 2003 Jan 1;34 (1): 1-10





6. Никитин Е.В., Сервецкий К.Л., Дорощенко П.В. Клинико-патогенетическое значение состояния перекисного окисления липидов в остром периоде вирусного гепатита В у лиц плавсостава и реко мендации по реабилитации //Вiсник морсько? медицини.-1998.- N1.- С. 15-17.





7. Internotional conference on "Superoxide dismutases: Recent Advanses and Clinical Applications" Маy 14-15, 1998. Institut Pasteur- Paris.- 125 p.





8. Davis JM, Richter SE, Biswas S, Rosenfeld WN, Parton L, Gewolb IH Parad R, Carlo W, Couser RJ, Baumgart S, Atluru V, Salerno L, Kassem N. Long-term follow-up of premature infants treated with prophylactic, intratracheal recombinant human CuZn superoxide dismutase. J Perinatol 2000;4:213-216





9. Скальный А. В., Кудрин А. В. Радиация, микроэлементы, антиоксиданты и





10. иммунитет, М. 2000, с. 427.





11. Клебанов Г. И., Теселкин Ю. О., Бабенкова И., Любицкий О. Б., Владимиров Ю. А. Антиоксидантная активность сыворотки крови //Вестник РАМН. -1999. -? 2. -С. 15-21.





12. Нагоев Б. С., Иванова М. Р. Роль системы антиоксидантной защиты организма в патогенезе острых вирусных гепатитов// Терапевтический архив ?11 2003, Кабардино-Балкарский государственный университет им. Х. М. Бербекова, Нальчик