Исследование периферической крови, костного мозга и внутренних органов беспородных белых мышей после плеторического введения оксиэтилкрахмала (оэк) и экринола (эк)

Целью настоящей работы явилось определение острой токсично-сти ОЭК и ЭК, как возможных плазмозаменителей в составе эмульсий ПФОС по общепринятой методике биологического тестирования на животных.

Материал и методы. Готовые лекарственные формы ОЭК и ЭК поста-влялись С.М.Яровой и Л.П.Гриневой из ВНИИ ТКГП Минмедбиопрома . Все эксперименты на животных выполнялись в ИБФ АН СССР совместно с сотрудниками лаборатории ме-дицинской биофизики.

Опыты с плеторическим введением ОЭК и ЭК проводились на 73 беспородных белых мышах - самцах, массой 25-35 г. В качестве конт-роля использовали интактных мышей - самцов, массой 25-35 г.(30 осо-бей).

Все животные были забиты (с соблюдением принципов эфтаназии) через 4 часа, 24 часа, 3 сут., 5 сут., 7 сут., 10 сут., 15 сут., I мес.,2 мес., 3 мес. после плеторического введения ЭК 9% в дозе 66 мл. на 1 кг. веса в/в и через такие же промежутки времени после плеторического введения ОЭК 6% в дозе 66 мл. на I кг. веса в/в.

В периферической крови мышей определяли количество эритроци-тов, лейкоцитов, тромбоцитов (в 1мкл), подсчитывали лейкоцитарную формулу. В костном мозге подсчитывали миелограмму.

После забоя оценивался внешний вид органов, кровенаполнение; пе-чень, селезенка и почки взвешивались. Кусочки тканей печени, селе-зeнки, почек, сердца, лeгких, головного мозга, тонкого и толстого кишеч-ника фиксировали в 10% нейтральном формалине, заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином, по Ван-Гизону, проводилась ПАС-реакция. Изменения в периферической крови,
гемограмме и миелограмме после плеторического введения ОЭК.

Через 4 часа после введения ОЭК количество эритроцитов в 1мкл снижалось более, чем в 2 раза, лейкоцитов в 1,5 раза, несколько уменьшалось количество тромбоцитов. Анемия сохранялась до 5 сут. после введения ОЭК. Полное возвращение количества эритроцитов к норме происходило на 10 сутки. Количество лейкоцитов в 1млк на протяжении от I до 10 суток подвержено значительным коле-баниям; разница показателей, по сравнению с контролем, статистически недостоверна. Максимальное приближение показателей к норме отмечалось на 7 сутки. Количество тромбоцитов в I мкл. сниженное в первые 3-е суток после введения ОЭК, повышалось на 5-7 сутки и нормализовалось к 10 сут-кам.

В 1-е сутки после плеторического введения мышам ОЭК в лейко-грамме отмечался относительный лимфоцитоз (содержание лим-фоцитов повышалось, по сравнению с исходным, в 1,2 раза) и нейтропения. Процентное содержание палочкоядерных и особенно сегментоядерных форм уменьшалось в 1,7 раза. Со стороны других клеток достоверных изменений не обнаруживалось. На 3-и сутки содержание лимфоцитов не отличалось от исходного, а сегментоядерных нейтрофилов - превышало та-ковое до введения в 1,5 раза. Начиная с этого срока и до 10 суток, в периферической крови мышей обнаруживалось до 3% юных нейтрофилов. К концу 2-й недели после опыта процентное содержание различных форм лейкоцитов периферической крови не отличалось от первоначального. К концу второго месяца после опыта в крови выявлялся относительный лимфоцитоз, сохраняющийся до 3-го месяца после введения ОЭК. Приближение показателей к норме происходило к концу третьего месяца.

Изучение миелограммы позволило отметить некоторое снижение бластных клеток в течение первых суток после опыта, затем отмечалась тенденция к нормализации к 7 суткам. Количество миелоцитов и метамиелоцитов, начиная от первых четырeх часов до поздних сроков, после введения ОЭК неуклонно снижалось и оставалось достоверно сниженным вплоть до второго месяца. Палочкоядерные лейкоциты были разделены на клетки с "баранкообразным ядром" (палочки крыс) и обычные. Если в первой группе клеток отмечалась выраженная тенденция к увеличению процентного содержания клеток в миелограмме (в 2 раза превысившего норму к концу первого месяца), то процентное содержание обычных палочкоядерных лейкоцитов на ранних сроках (до 7 суток) было снижено, по сравнению с нормой. Нормализация показателей происходила к концу 10-ых суток (табл. 1).

Таблица 1. Миелограмма костного мозга мышей в различные сроки
после плеторического введения оксиэтилкрахмала (М?м)

* - достоверное различие с контролем (р < 0,05)

Процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов снижалось до 3-х суток, затем на 5-е сутки увеличивалось примерно в 2 раза выше нормы и на 7-10 сутки, а также через 1-2 месяца после введения ОЭК оставалось выше нормы (данные последних сроков статистически недостоверны (табл. 1)).

Процент лимфоцитов через 4 и 24 часа уве-личивался к концу первых суток (статистически достоверное увеличение в 1,5 раза), по сравнению с нормой. Нормализация показателей отмечалась к 10 суткам. На сроках 1-2 мес. отмечалось увеличение процентного содержания лимфоцитов по сравнению с нормой. Изменения в периферической крови,
гемограмме и миелограмме после плеторического введения ЭК.

Выраженная анемия, отмечаемая на 1-3 сутки после пле-торического введения ЭК, сменялась нормализацией показателей на
7-е сутки и, в дальнейшем, на 10-14 сутки изменения количества эритроци-тов в I мкл. не имели определeнных закономерностей (показатель оста-вался ниже нормы). Значения показателей на сроках 2-3 мес. были приближены к норме.

Изменения процентного содержания лейкоцитов были так-же лишены определeнных закономерностей. Снижение показателя через 4 ча-са после введения ЭК переходило в увеличение к концу I суток; нормализация показателя, достигаемая на 7 сутки, в дальнейшем, на
10-14 сутки, сменялась относительной лейкопенией. Все данные оказались статистически недостоверными.

Изменения процентного содержания тромбоцитов также отличались определeнным непостоянством в тенденциях развития. Снижение показателей через 4 часа после введения ЭК сменялись нормализацией к концу I суток; к 7 суткам отмечался тромбоцитоз (данные статистически достоверны). Нормализация показателей на 10 сутки сменялась их уве-личением к концу 14 суток. Тромбоцитоз отмечался и в конце 2 месяца.

Плеторическое введение ЭК мышам сопровождалось повышением в первые 4 часа после введения процентного содержания лимфоцитов в 1,2 раза, сниже-нием нейтрофилов в 1,8 раза, главным образом, за счeт сегментоядерных форм. Содержание других видов клеток в гемограмме достоверно не изменялось. Через 24 часа наблюдалась обратная картина: процентное содержание лимфоцитов снижалось, составляя 69% от исходного, а содержание сегментоядерных нейтрофилов возрастало, по сравнению с исходными данными, в 2,1 раза. На 5-7 сутки лейкограмма отличалась от исходной наличием юных форм нейтрофилов, к 10-14 суткам лейкограмма достигла исходного уровня. Интересно отметить значительное уве-личение процента лимфоцитов в лейкограмме к концу 3 месяца после введения ЭК.

Изучение миелограммы выявило уменьшение количества бластных клеток в сроках от 4 часов до 10 суток с нормализацией показателя к 14 суткам. Процентное содержание миелоцитов и метамиелоцитов в срок от 4 часов до 14 суток после введения ЭК было подвержено колебаниям, не носящим определeнных закономерностей. Значение по-казателя процентного содержания метамиелоцитов на 14 сутки после введения оказа-лось несколько приближено к норме. Нормализация процентного со-держания метамиелоцитов, достигаемая на I мес., сменялась выражен-ным его уменьшением на 2 месяце, после введения ЭК (табл. 2).

Процентное содержание "палочек крыс" имело тенденцию к неко-торому увеличению на ранних сроках с последующей нормализацией на 7 сутки и с дальнейшим увеличением на 10-14 сутки, оставаясь увеличенным в сроке до 1-2 мес. после введения.

Таблица 2. Миелограмма костного мозга мышей в различные сроки после плеторического введения экринола (М?м)

* - достоверное различие с контролем (р < 0,05)

Процентное содержание обычных палочкоядерных лейкоцитов нормализовалось к 5-7 суткам, но затем уменьшалось, оставаясь достоверно сниженным до 1 мес. после введения.

Процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов достигало пи-ка на 3 сутки (увеличение в 2 раза, по сравнению с нормой), на 10-14 сутки приближалось к норме. Отмечалось снижение количества нейтрофилов в 2,5 раза к концу второго месяца после введения ЭК с тенденцией к нормализации к 3 мес.

Изменения красной крови выражались в увеличении числа базофильных нормобластов на 3 сутки после введения ЭК с последующим уменьшением их количества на 7-10 сутки. К 1 и 2 месяцу после введения ЭК отмечалось досто-верное снижение, по сравнению с нормой, числа полихроматофильных и базофильных нормобластов.

Процентное содержание лимфоцитов в костном мозге достигало максимальных величин к 1 суткам (в 2 раза превышало норму), с тенденцией к снижению показателей на 3-5 сутки и увеличению на 10-14 сутки. Статистически недостоверное увеличение ко-личества лимфоцитов в миелограмме сохранялось до 1-2 мес. после введения ЭК.

Таким образом при сравнении эффекта воздействия ОЭК и ЭК сле-дует отметить менее выраженные изменения при введении ОЭК. Восстановление основных показателей периферической крови происходило на 7-10 сутки с отсутствием выражен-ных изменений на поздних сроках, что подтверждается и при изучении миелограммы, исключая выраженный лимфоцитоз в миелограм-ме на сроках 1-2 мес. после плеторического введения ОЭК. При исполь-зовании экринола достигалась лишь частичная нормализация основных показателей клеточного состава периферической крови на 5-7 сутки, в дальнейшем сменяемая трудноподдающимися объяснению колебаниями показателей, особенно выраженными при подсчeте количества тромбо-цитов. Изменения в миелограмме на поздних сроках после плетори-ческого введения ЭК характеризовались некоторым угнетением красного ростка, более выраженным, чем при введении ОЭК. Морфология внутренних органов беспородных белых мышей
после плеторического введения ОЭК и ЭК.

Основные морфологические изменения после введения экринола и оксиэтилкрахмала однотипны, в основном проявляются в печени, селезeнке и почках (табл. 3). Они связаны с вакуолизацией гепатоцитов и клеток Купфера, макро-фагов и эндотелия сосудов селезенки, эпителия проксимальных и дистальных отделов канальцев почек. В вакуолях определялась положительная ПАС-реакция от слабо выраженной
(4 часа - 1 сутки) до выраженной (трое суток) и затем умеренной и слабой (5-7 суток).

Таблица 3. Динамика изменения массы внутренних органов мышей при плеторическом введении OЭК и ЭК .( в мг).

органы	Время эксперимента
	Интактные животные	4 час	24 час	3 сут.	5 сут.	7 сут.	10-11 сут.	15-17 сут.	2 мес.	3 мес.
печень	1360? 114	1977? 152	2022? 53	1892? 72	1900? 49	1800? 113	1770? 98	1450? 106	1400? 58	1420? 37
селезeнка	152? 31	218? 23	186? 13	186? 16	190? 26	187? 20	160? 18	165? 51	158? 27	160? 30
почки	173? 35	240? 42	235? 34	240? 50	231? 26	225? 16	200? 18	181? 24	177? 28	180? 17
Количество животных	n=30	n=10	n=10	n=10	n=10	n=10	n=10	n=8	n=7	n=8

Кроме того, во всех внутренних органах наблюдались расстройст-ва кровообращения в виде расширения артериол, капилляров, стаза, отeка, в отдельных местах диапедезных периваскулярных кровоизлияний (от 4 часов до 5-7 суток после введения ОЭК и ЭК), а также круглоклеточная периваскулярная инфильтрация и высоко положительная ПАС-реакция в про-свете канальцев почек (на 7-15 сутки после введения).

Через 0,5-1 мес. после введения изменений, связанных с накоплением ОЭК и ЭК в паренхиме печени, почек и селезeнки мышей, не определялось. Данные органы в этот период по морфологии соответствовали таковым у интактных животных.

Таким образом, большая часть вводимого продукта выделялась через почки, незначительное количество накапливалось как в периваскулярных пространствах почек, селезeнки, печени, так и в системе мононуклеарных фагоцитов этих органов, и ещe меньшая часть - в паренхиме печени. В данных органах происходили дистрофические из-менения, но значительных повреждений не обнаруживалось. В течение
7-14 суток после введения происходило постепенное выведение ОЭК и ЭК из паренхимы органов (образование периваскулярных гранулем) и в дальнейшем выведение их почками. По всей видимости, при плеторическом введении ОЭК и ЭК изменения в органах связаны не столько с токсичностью вводимого продукта, сколько с большой дозой введения его и увеличением ОЦК (гиперволемией).

Список литературы

1. Васильев А.Э., Львов С.Г., Осипов А.А. Сравнительная морфологическая характеристика внутренних органов кроликов после плеторического введения перфторана и перфукола.// Перфторуглеродные активные среды для медицины и биологии (новые аспекты исследований).- Сборник научных трудов под редакцией Иваницкого Г.Р., Воробьева С.И. Пущино. 1993, с. 196-201.


2. Голубев А.М. Итоги и перспективы изучения влияния фторуглеродных кровезаменителей на биологические системы.// Там же, с.86-93.


3. Иваницкий Г.Р., Воробьeв С.И. Инженерия искусственных плазмо-замени-телей крови с газотранспортной функцией на основе перфторуглеродных эмульсий.// Там же с.5-53.


4. Крылов Н.Л., Белоярцев Ж.Ф., Мороз В.В. .Бобровский Р.Б., Симоненко З.С., Макаров К.Н., Кнунянц И.Л. Опыт применения фторуглеродных оксигенаторов в клинической практике.// Фторуглеродные газопереносящие среды. - Сборник научных трудов под редакцией Ф.Ф. Белоярцева. Пущино.1984, с. 5-17.


5. Матвеев А.Б., Осипов А.А., Вереина Т.Л., Львов С.Г., Кузнецова Л.Н., Блохин А.Н., Покровский Ю.Э. Изучение влияния фторуглеродных эмульсий и их компонентов на биологические системы (заключительный отчeт)// Депонировано в ВНТИЦ ГККТ инв. ? 02900016240, ? Гос. регистрации 01.86.007854, Астрахань 1990, 183 с.


Осипов А.А, Львов С.Г. Морфогистохимическая характеристика миокарда при экспериментальном инфаркте у собак с предварительным введением перфторана и солевой композиции.// Труды I съезда Российского общества патологоанатомов, М. 1996 с. 162-163