Медико-биологический
информационный портал
для специалистов
 
БИОМЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ Medline.ru

СОДЕРЖАНИЕ ЖУРНАЛА:
Физико-химическая биология

Клиническая медицина

Профилактическая медицина

Медико-биологические науки


АРХИВ:

Фундаментальные исследования

Организация здравохраниения

История медицины и биологии



Последние публикации

Поиск публикаций

Articles

Архив :  2000 г.  2001 г.  2002 г. 
               2003 г.  2004 г.  2005 г. 
               2006 г.  2007 г.  2008 г. 
               2009 г.  2010 г.  2011 г. 
               2012 г.  2013 г.  2014 г. 
               2015 г.  2016 г.  2017 г. 

Редакционная информация:
        Опубликовать статью
        Наша статистика


 РЕДАКЦИЯ:
Главный редактор

Заместители главного редактора

Члены редколлегии
Специализированные редколлегии


 УЧРЕДИТЕЛИ:
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки
"Институт токсикологии Федерального медико-биологического агентства"
(ФГБУН ИТ ФМБА России)

Институт теоретической и экспериментальной биофизики Российской академии наук.

ООО "ИЦ КОМКОН".




Адрес редакции и реквизиты

199406, Санкт-Петербург, ул.Гаванская, д. 49, корп.2

ISSN 1999-6314

Российская поисковая система
Искать: 


ТОМ 4, СТ. 69 (сc. 93-94) // Февраль, 2003 г.

ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ДИНАМИКИ ЗАЖИВЛЕНИЯ КОЖНЫХ РАН

Г.М.Харин, Ю.А.Челышев, Т.Р.Джорджикия, К.В.Ситкина, А.З.Шакирова
Казань



  << Содержание

 

Морфологические аспекты проблемы заживления ран продолжают оставаться в центре внимания исследователей на протяжении многих лет, несмотря на обилие литературных данных по этой проблеме. Не случайно, что на морфологических особенностях раневого процесса, включающих результаты гистологического, гистохимического и электронно-микроскопичес-кого исследования, базируется установление прижизненности и давности причинения повреждений при производстве судебно-медицинских экспертиз.

По сложившейся традиции, определение сроков возникновения повреждений основано на выяснении степени выраженности и соотношения в пораженных тканях процессов альтерации, воспаления и регенерации, сопровождающих прижизненную реакцию организма на любое травматическое воздействие. Однако в судебно-медицинской практике оценка проявления этих процессов на гистологических препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином, не всегда удовлетворяет экспертов. Получаемая информация, как правило, не отражает уровень дифференцировки клеточных элементов и степень зрелости тканевых структур, что приводит к существенной ошибке при интерпретации результатов гистологического исследования.

Определенные перспективы в объективизации реактивных изменений и регенераторных процессов, развивающихся в зоне повреждений, открываются в связи с использованием в судебно-гистологической практике иммуногистохимических методов, основанных на высокоспецифичном взаимодействии антигена с антителом и позволяющих при наличии соответствующих меченых антител выявлять практически любой тканевой или клеточный антиген. Преимущество этих методов исследования стало очевидным после разработки техники получения моноклональных антител и выявления маркеров промежуточных филаментов, рецепторов факторов роста, молекул адгезии и других. Достигнутые успехи в области иммуноморфологии уже нашли свое отражение в судебно-медицинских исследованиях (Int.J.Legal Med., 1992-1999), касающихся методических подходов к оценке заживления кожных ран и разработки критериев давности причинения повреждений.

Для этих целей в иммуногистохимических исследованиях используются маркеры различных клеточных элементов, антитела к молекулам адгезии, компонентам внеклеточного матрикса, про- и противоапоптозным белкам, а также к антигенам пролиферирующих клеток. В ряде работ P.Betz e.a. (1992-1995) на основании изучения локализации цитокератинов 5 и 13 прослежена динамика реэпителизации кожных ран и распределения в них маркера пролиферации антигена Ki 67, что позволило обнаружить пролиферирующие фибробласты начиная с 1,5 суток после повреждения. Использование комплекса моно- и поликлональных антител дало авторам возможность получить ценную информацию о прижизненности и сроках образования ран кожи на основе изучения вновь синтезируемого коллагена различных типов, тенасцина, ламинина, гепарансульфат протеогликана, альфа-I-антихимотрипсина. Ими также было установлено повышение содержания фибронектина во внеклеточном матриксе соединительной ткани уже через несколько минут после травмы, даже до появления в зоне повреждения гранулоцитов. Диагностическая значимость изменений содержания и локализации фибронектина в ранах была подтверждена исследованиями P.Klir е.а. (1996).

Проведенное J.Dressler е.а. (1997, 1999) иммуногистохимическое изучение кожных ран способствовало обнаружению стойкой экспрессии ICAM-I (CD 54) в кератиноцитах и эндотелиоцитах на сроках повреждения кожи от 1,5 часов до 3,5 суток, что коррелировало со степенью воспаления в ранах. Этими авторами прослежены особенности состояния молекул адгезии на эндотелии сосудов пораженной кожи по интенсивности позитивной реакции на VCAM-I (CD 106) и PECAM-I (CD 31), наиболее выраженной на сроках от 3 часов до 3,5 суток. Ими же была установлена строго положительная иммуногистохимическая реакция на Р-селектин в интервале от 3 минут до 7 часов после повреждения кожи. Это дало основание рассматривать полученные результаты в качестве индикаторов прижизненности и давности причинения ран кожи. Подобную значимость может иметь степень экспрессии белка р53 фибробластсами поврежденной ткани, отчетливо прослеживаемая спустя 3 суток с максимальной выраженностью между 3-11 неделями (R.Hausmann е.а., 1998), а также положительная иммуногистохимическая реакция на интерлейкин-1 альфа в активированных нейтрофилах при сроках повреждения кожи от 4 часов до 1 суток (Т.Kondo е.а., 1999).

Ключевым звеном в процессе заживления ран является регенерация поврежденных тканей, во многом связанная с интенсивностью пролиферации клеточных элементов. Необходимым компонентом репаративной регенерации кожи служат фибропластические процессы, приводящие к образованию рубцов, структурные особенности которых могут отражать давность (срок) причинения повреждений. Это в значительной мере определяет целесообразность изучения в пораженных участках кожи экспрессии ядерного антигена пролиферирующих клеток (PCNA). Предварительные результаты наших исследований, проведенных на крысах с нанесением в области спины стандартных резаных ран кожи или термических повреждений IIIб степени, свидетельствовали о возрастании на 2-3 сутки количества пролиферирующипх клеток в базальном слое эпидермиса и на незначительном удалении от границ повреждения в сосочковом и сетчатом слоях дермы. В зависимости от характера повреждения кожи достоверное увеличение экспрессии PCNA в разных участках механических и термических повреждений, как правило, ограничивалось интервалом 1-2 недели. Сопоставление полученных данных с результатами гистологического и морфометрического исследования позволило установить временные соотношения между пролиферативной активностью клеточных элементов и мобилизацией клеток по краям повреждения, миграцией эпителиоцитов на раневой поверхности, выраженностью фибропластических процессов, интенсивностью формирования волокнистых структур в различных зонах пораженной кожи.

Интенсивность процесса гибели клеток может служить надежным критерием оценки особенностей репаративной регенерации кожи и, следовательно, давности причинения повреждений. С этой точки зрения представляется оправданным использование маркеров гибели клеток для установления объема популяции кератиноцитов и клеток соединительной ткани, вступающих в апоптоз в результате повреждения (Bcl-2, Bax, CD 95, p53).

Анализ данных литературы и предварительные результаты наших исследований показывают, что характер основных событий, развивающихся в коже после причинения повреждений, можно установить при использовании, наряду с уже отмеченными, следующих маркеров.


М а р к е р ы

К л е т о ч н ы е   т и п ы

Цитокератины К5 и К14

Кератиноциты

Десмин, альфа-гладкомышечный актин

Миофибробласты

CD 15

Гранулоциты

Интерлейкин-1 альфа

Активированные нейтрофилы

LCA

Лимфоциты

CD 68, альфа-1-антихимотрипсин

Моноциты

ED 1

Макрофаги

CD 41

Тромбоциты

CD 56

NK-cell (естественные киллеры)


Наши наблюдения за динамикой заживления термических ожогов и резаных ран у крыс свидетельствуют о целесообразности одновременного применения в иммуногистохимических исследованиях набора маркеров различных клеточных элементов и тканевых структур (панели моно- и поликлональных антител). Объективизировать получаемую при этом информацию следует путем использования различных приемов морфометрического анализа, позволяющих на иммуногистохимических препаратах определять точную локализацию, а также количественное соотношение клеточных элементов и тканевых структур в зоне повреждения. Таким образом, внедрение в экспертную практику методов иммуногистохимического анализа означает переход на более высокий уровень изучения посттравматической регенерации тканей, что должно способствовать разработке достоверных критериев оценки прижизненности и давности (сроков) причинения повреждения.


вверх

  << Содержание

 

Альманах судебной медицины N 2 (2001), стр.

Свидетельство о регистрации сетевого электронного научного издания N 077 от 29.11.2006
Журнал основан 16 ноября 2000г.
Выдано Министерством РФ по делам печати, телерадиовещания и средств массовых коммуникаций
(c) Перепечатка материалов сайта Medline.Ru возможна только с письменного разрешения редакции

Размещение рекламы

Rambler's Top100