Получение синтетических генов для молекулярно-биологических исследований на примере человеческого плацентарного ингибитора рибонуклеаз Medline.ru - медико-биологический информационный портал Медлайн.ру

Получение синтетических генов для молекулярно-биологических исследований на примере человеческого плацентарного ингибитора рибонуклеаз

Хаустов С.А., Матвиенко Н.И., Железная Л.А.

Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, Пущино; Институт белка РАН, Пущино

Резюме
Нуклеотидная последовательность гена плацентарного ингибитора рибонуклеаз оптимизирована для экспрессии в Escherichia coli; для получения гена разработана новая стратегия химико-ферментативного синтеза ДНК. Экспрессия полученного гена позволила добиться продукции активного белка примерно в 4 раза выше, чем при экспрессии нативного гена. Для получения функционально чистого препарата белка разработана новая схема хроматографической очистки без применения иммобилизованной рибонуклеазы. Оптимизация структуры искусственного гена позволяет экспрессировать его как в E.coli, так и в эукариотических системах.

Ключевые слова
ингибитор рибонуклеаз, химико-ферментативный синтез генов, кодоновый состав, рекомбинантная экспрессия, очистка белков.

(статья в формате PDF. Для просмотра необходим Adobe Acrobat Reader)

открыть статью в

новом окне

Список литературы

Хаустов С.А., Железная Л.А., Матвиенко Н.И. 2008. Синтез гена человеческого плацентарного ингибитора рибонуклеаз и его экспрессия в E.coli. Технологии живых систем, №3 (в печати).

Au L.C., Yang F.Y., Yang W.J., Lo S.H., Kao C. F. 1998. Gene synthesis by a LCR-based approach: high-level production of leptin-L54 using synthetic gene in Escherichia coli. Biochem. Biophys.Res. Commun., 248, 200-203.

Binkowski B.F., Richmond K.E., Kaysen J., Sussman M.R., Belshaw P.J. 2005. Correcting errors in synthetic DNA through consensus shuffling. Nucleic Acids Res., 33(6), e55.

Blackburn P. 1979. Ribonuclease inhibitor from human placenta: rapid purification and assау. J. Biol. Chem., 254(24), 12484-12487.

Blackburn P., Jailkhani B.L. 1979. Ribonuclease inhibitor from human placenta: interaction with derivatives of ribonuclease A. J Biol Chem., 254(24), 12488-93.

Carr P.A., Park J.S., Lee Y.J., Yu T., Zhang S., Jacobson J.M. 2004. Protein-mediated error correction for de novo DNA synthesis. Nucleic Acids Res., 32(20), e162.

Cline J, Braman J C., Hogrefe H H. 1996. PCR fidelity of Pfu DNA polymerase and other thermostable DNA polymerases. Nucleic Acids Research, 24(18), 3546–3551.

Dillon P. J., Rosen C. A. 1990. A rapid method for the construction of synthetic genes using the polymerase chain reaction. BioTechniques, 9, 298-300.

Fu P., Chen J., Tian Y., Watkins T., Cui X., Zhao B. 2005. Anti-tumor effect of hematopoietic cells carrying the gene of ribonuclease inhibitor. Cancer Gene Ther., 12(3), 268-75.