Целью настоящей работы явилось определение острой токсично-сти ОЭК и ЭК, как возможных плазмозаменителей в составе эмульсий ПФОС по общепринятой методике биологического тестирования на животных.

Материал и методы. Готовые лекарственные формы ОЭК и ЭК поста-влялись С.М.Яровой и Л.П.Гриневой из ВНИИ ТКГП Минмедбиопрома . Все эксперименты на животных выполнялись в ИБФ АН СССР совместно с сотрудниками лаборатории ме-дицинской биофизики.

Опыты с плеторическим введением ОЭК и ЭК проводились на 73 беспородных белых мышах - самцах, массой 25-35 г. В качестве конт-роля использовали интактных мышей - самцов, массой 25-35 г.(30 осо-бей).

Все животные были забиты (с соблюдением принципов эфтаназии) через 4 часа, 24 часа, 3 сут., 5 сут., 7 сут., 10 сут., 15 сут., I мес.,2 мес., 3 мес. после плеторического введения ЭК 9% в дозе 66 мл. на 1 кг. веса в/в и через такие же промежутки времени после плеторического введения ОЭК 6% в дозе 66 мл. на I кг. веса в/в.

В периферической крови мышей определяли количество эритроци-тов, лейкоцитов, тромбоцитов (в 1мкл), подсчитывали лейкоцитарную формулу. В костном мозге подсчитывали миелограмму.

После забоя оценивался внешний вид органов, кровенаполнение; пе-чень, селезенка и почки  взвешивались. Кусочки тканей печени, селе-зёнки, почек, сердца, лёгких, головного мозга, тонкого и толстого кишеч-ника фиксировали в 10% нейтральном формалине, заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином, по Ван-Гизону, проводилась ПАС-реакция. Изменения в периферической крови,
гемограмме и миелограмме после плеторического введения ОЭК.

 Через 4 часа после введения ОЭК количество эритроцитов в 1мкл снижалось более, чем в 2 раза, лейкоцитов в 1,5 раза, несколько уменьшалось количество тромбоцитов. Анемия сохранялась до 5 сут. после введения ОЭК. Полное возвращение количества эритроцитов к норме происходило на 10 сутки. Количество лейкоцитов в 1млк на протяжении от I до 10 суток подвержено значительным коле-баниям; разница показателей, по сравнению с контролем, статистически недостоверна. Максимальное приближение показателей к норме отмечалось на 7 сутки. Количество тромбоцитов в I мкл. сниженное в первые 3-е суток после введения ОЭК, повышалось на 5-7 сутки и нормализовалось к 10 сут-кам.

В 1-е сутки после плеторического введения мышам ОЭК в лейко-грамме отмечался относительный лимфоцитоз (содержание лим-фоцитов повышалось, по сравнению с исходным, в 1,2 раза) и нейтропения. Процентное содержание палочкоядерных и особенно сегментоядерных форм уменьшалось в 1,7 раза. Со стороны других клеток достоверных изменений не обнаруживалось. На 3-и сутки содержание лимфоцитов не отличалось от исходного, а сегментоядерных нейтрофилов - превышало та-ковое до введения в 1,5 раза. Начиная с этого срока и до 10 суток, в периферической крови мышей обнаруживалось до 3% юных нейтрофилов. К концу 2-й недели после опыта процентное содержание различных форм лейкоцитов периферической крови не отличалось от первоначального. К концу второго месяца после опыта в крови выявлялся относительный лимфоцитоз, сохраняющийся до 3-го месяца после введения ОЭК. Приближение показателей к норме происходило к концу третьего месяца.

Изучение миелограммы позволило отметить некоторое снижение бластных клеток в течение первых суток после опыта, затем отмечалась тенденция к нормализации к 7 суткам. Количество миелоцитов и метамиелоцитов, начиная от первых четырёх часов до поздних сроков, после введения ОЭК неуклонно снижалось и оставалось достоверно сниженным вплоть до второго месяца. Палочкоядерные лейкоциты были разделены на клетки с "баранкообразным ядром" (палочки крыс) и обычные. Если в первой группе клеток отмечалась выраженная тенденция к увеличению процентного содержания клеток в миелограмме (в 2 раза превысившего норму к концу первого месяца), то процентное содержание обычных палочкоядерных лейкоцитов на ранних сроках (до 7 суток) было снижено, по сравнению с нормой. Нормализация показателей происходила к концу 10-ых суток (табл. 1).

Таблица 1. Миелограмма костного мозга мышей в различные сроки
после плеторического введения оксиэтилкрахмала (М±м)

* - достоверное различие с контролем (р < 0,05)

Процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов снижалось до 3-х суток, затем на 5-е сутки увеличивалось примерно в 2 раза выше нормы и на 7-10 сутки, а также через 1-2 месяца после введения ОЭК оставалось выше нормы (данные последних сроков статистически недостоверны (табл.  1)).

Процент лимфоцитов через 4 и 24 часа уве-личивался к концу первых суток (статистически достоверное увеличение в 1,5 раза), по сравнению с нормой. Нормализация показателей отмечалась к 10 суткам. На сроках 1-2 мес. отмечалось увеличение процентного содержания лимфоцитов по сравнению с нормой. Изменения в периферической крови,
гемограмме и миелограмме после плеторического введения ЭК.

Выраженная анемия, отмечаемая на 1-3 сутки после пле-торического введения ЭК, сменялась нормализацией показателей на
7-е сутки и, в дальнейшем, на 10-14 сутки изменения количества эритроци-тов в I мкл. не имели определённых закономерностей (показатель оста-вался ниже нормы). Значения показателей на сроках 2-3 мес. были приближены к норме.

Изменения процентного содержания лейкоцитов были так-же лишены определённых закономерностей. Снижение показателя через 4 ча-са после введения ЭК переходило в увеличение к концу I суток; нормализация показателя, достигаемая на 7 сутки, в дальнейшем, на
10-14 сутки, сменялась относительной лейкопенией. Все данные оказались статистически недостоверными.

Изменения процентного содержания тромбоцитов также  отличались определённым непостоянством в тенденциях развития. Снижение показателей через 4 часа после введения ЭК сменялись нормализацией к концу I суток; к 7 суткам отмечался тромбоцитоз (данные статистически достоверны). Нормализация показателей на 10 сутки сменялась их уве-личением к концу 14 суток. Тромбоцитоз отмечался и в конце 2 месяца.

Плеторическое введение ЭК мышам сопровождалось повышением в первые 4 часа после введения процентного содержания лимфоцитов в 1,2 раза, сниже-нием нейтрофилов в 1,8 раза, главным образом, за счёт сегментоядерных форм. Содержание других видов клеток в гемограмме достоверно не изменялось. Через 24 часа наблюдалась обратная картина: процентное содержание лимфоцитов снижалось,  составляя 69% от исходного, а содержание сегментоядерных нейтрофилов возрастало, по сравнению с исходными данными, в 2,1 раза. На 5-7 сутки лейкограмма отличалась от исходной наличием юных форм нейтрофилов, к 10-14 суткам лейкограмма достигла исходного уровня. Интересно отметить значительное уве-личение процента лимфоцитов в лейкограмме к концу 3 месяца после введения ЭК.

Изучение миелограммы выявило уменьшение количества бластных клеток в сроках от 4 часов до 10 суток с нормализацией показателя к 14 суткам. Процентное содержание миелоцитов и метамиелоцитов в срок от 4 часов до 14 суток после введения ЭК было подвержено колебаниям, не носящим определённых закономерностей. Значение по-казателя процентного содержания метамиелоцитов на 14 сутки после введения оказа-лось несколько приближено к норме. Нормализация процентного со-держания метамиелоцитов, достигаемая на I мес., сменялась выражен-ным его уменьшением на 2 месяце, после введения ЭК (табл. 2).

Процентное содержание "палочек крыс" имело тенденцию к неко-торому увеличению на ранних сроках с последующей нормализацией на 7 сутки и с дальнейшим увеличением на 10-14 сутки, оставаясь увеличенным в сроке до 1-2 мес. после введения.

Таблица 2. Миелограмма костного мозга мышей в различные сроки после плеторического введения экринола (М±м)

* - достоверное различие с контролем (р < 0,05)

Процентное содержание обычных палочкоядерных лейкоцитов нормализовалось к 5-7 суткам, но затем уменьшалось, оставаясь достоверно сниженным до 1 мес. после введения.

Процентное содержание сегментоядерных нейтрофилов достигало пи-ка на 3 сутки (увеличение в 2 раза, по сравнению с нормой), на 10-14 сутки приближалось к норме. Отмечалось снижение количества нейтрофилов в 2,5 раза к концу второго месяца после введения ЭК с тенденцией к нормализации к 3 мес.

Изменения красной крови выражались в увеличении числа базофильных нормобластов на 3 сутки после введения ЭК с последующим уменьшением их количества на 7-10 сутки. К 1 и 2 месяцу после введения ЭК отмечалось досто-верное снижение, по сравнению с нормой, числа полихроматофильных и базофильных нормобластов.

Процентное содержание лимфоцитов в костном мозге достигало максимальных величин к 1 суткам (в 2 раза превышало норму), с тенденцией к снижению показателей на 3-5 сутки и увеличению на 10-14 сутки. Статистически недостоверное увеличение ко-личества лимфоцитов в миелограмме сохранялось до 1-2 мес. после введения ЭК.

Таким образом при сравнении эффекта воздействия ОЭК и ЭК сле-дует отметить менее выраженные изменения при введении ОЭК. Восстановление основных показателей периферической крови происходило на 7-10 сутки с отсутствием выражен-ных изменений на поздних сроках, что подтверждается и при изучении миелограммы, исключая выраженный лимфоцитоз в миелограм-ме на сроках 1-2 мес. после плеторического введения ОЭК. При исполь-зовании экринола достигалась лишь частичная нормализация основных показателей клеточного состава периферической крови на 5-7 сутки, в дальнейшем сменяемая трудноподдающимися объяснению колебаниями показателей, особенно выраженными при подсчёте количества тромбо-цитов. Изменения в миелограмме на поздних сроках после плетори-ческого введения ЭК характеризовались некоторым угнетением красного ростка, более выраженным, чем при введении ОЭК. Морфология внутренних органов беспородных белых мышей
после плеторического введения ОЭК и ЭК.

Основные морфологические изменения после введения экринола и оксиэтилкрахмала однотипны, в основном проявляются в печени, селезёнке и почках (табл. 3). Они связаны с вакуолизацией гепатоцитов и клеток Купфера, макро-фагов и эндотелия сосудов селезенки, эпителия проксимальных и дистальных отделов канальцев почек. В вакуолях определялась положительная ПАС-реакция от слабо выраженной
(4 часа - 1 сутки) до выраженной (трое суток) и затем умеренной и слабой (5-7 суток).

Таблица 3.  Динамика изменения массы внутренних органов  мышей при плеторическом введении OЭК и ЭК .( в   мг).

органы	Время эксперимента
	Интактные животные	4 час	24 час	3 сут.	5 сут.	7 сут.	10-11 сут.	15-17 сут.	2 мес.	3 мес.
печень	1360± 114	1977± 152	2022± 53	1892± 72	1900± 49	1800± 113	1770± 98	1450± 106	1400± 58	1420± 37
селезёнка	152± 31	218± 23	186± 13	186± 16	190± 26	187± 20	160± 18	165± 51	158± 27	160± 30
почки	173± 35	240± 42	235± 34	240± 50	231± 26	225± 16	200± 18	181± 24	177± 28	180± 17
Количество животных	n=30	n=10	n=10	n=10	n=10	n=10	n=10	n=8	n=7	n=8

Кроме того, во всех внутренних органах наблюдались расстройст-ва кровообращения в виде расширения артериол, капилляров, стаза, отёка, в отдельных местах диапедезных периваскулярных кровоизлияний (от 4 часов до 5-7 суток после введения ОЭК и ЭК), а также круглоклеточная периваскулярная инфильтрация и высоко положительная ПАС-реакция в про-свете канальцев почек (на 7-15 сутки после введения).

Через 0,5-1 мес. после введения изменений, связанных с накоплением ОЭК и ЭК в паренхиме печени, почек и селезёнки мышей, не определялось. Данные органы в этот период по морфологии соответствовали таковым у интактных животных.

Таким образом, большая часть вводимого продукта выделялась через почки, незначительное количество накапливалось как в периваскулярных пространствах почек, селезёнки, печени, так и в системе мононуклеарных фагоцитов этих органов, и ещё меньшая часть -  в паренхиме печени. В данных органах происходили дистрофические из-менения, но значительных повреждений не обнаруживалось. В течение
7-14 суток после введения происходило постепенное выведение ОЭК и ЭК из паренхимы органов (образование периваскулярных гранулем) и в дальнейшем выведение их почками. По всей видимости, при плеторическом введении ОЭК и ЭК изменения в органах связаны не столько с токсичностью вводимого продукта, сколько с большой дозой введения его и увеличением ОЦК (гиперволемией).


Литература:

1. Васильев А.Э., Львов С.Г., Осипов А.А. Сравнительная морфологическая характеристика внутренних органов кроликов после плеторического введения перфторана и перфукола.// Перфторуглеродные активные среды для медицины и биологии (новые аспекты исследований).- Сборник научных трудов под редакцией Иваницкого Г.Р., Воробьева С.И. Пущино. 1993, с. 196-201.
2. Голубев А.М. Итоги и перспективы изучения влияния фторуглеродных кровезаменителей на биологические системы.// Там же, с.86-93.
3. Иваницкий Г.Р., Воробьёв С.И. Инженерия искусственных плазмо-замени-телей крови с газотранспортной функцией на основе перфторуглеродных эмульсий.// Там же с.5-53.
4. Крылов Н.Л., Белоярцев Ж.Ф., Мороз В.В. .Бобровский Р.Б., Симоненко З.С., Макаров К.Н., Кнунянц И.Л. Опыт применения фторуглеродных оксигенаторов в клинической практике.// Фторуглеродные газопереносящие среды. - Сборник научных трудов под редакцией Ф.Ф. Белоярцева. Пущино.1984, с. 5-17.
5. Матвеев А.Б., Осипов А.А., Вереина Т.Л., Львов С.Г., Кузнецова Л.Н., Блохин А.Н., Покровский Ю.Э. Изучение влияния фторуглеродных эмульсий и их компонентов на биологические системы (заключительный отчёт)// Депонировано в ВНТИЦ ГККТ инв. © 02900016240, © Гос. регистрации 01.86.007854, Астрахань 1990, 183 с.
Осипов А.А, Львов С.Г. Морфогистохимическая характеристика миокарда при экспериментальном инфаркте у собак с предварительным введением перфторана и солевой композиции.// Труды I съезда Российского общества патологоанатомов, М. 1996 с. 162-163

Страница