Медико-биологический
информационный портал
для специалистов
 
БИОМЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ Medline.ru

СОДЕРЖАНИЕ ЖУРНАЛА:
Физико-химическая биология

Клиническая медицина

Профилактическая медицина

Медико-биологические науки


АРХИВ:

Фундаментальные исследования

Организация здравохраниения

История медицины и биологии



Последние публикации

Поиск публикаций

Articles

Архив :  2000 г.  2001 г.  2002 г. 
               2003 г.  2004 г.  2005 г. 
               2006 г.  2007 г.  2008 г. 
               2009 г.  2010 г.  2011 г. 
               2012 г.  2013 г.  2014 г. 
               2015 г.  2016 г. 

Редакционная информация:
        Опубликовать статью
        Наша статистика


 РЕДАКЦИЯ:
Главный редактор

Заместители главного редактора

Члены редколлегии
Специализированные редколлегии


 УЧРЕДИТЕЛИ:
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки
"Институт токсикологии Федерального медико-биологического агентства"
(ФГБУН ИТ ФМБА России)

Институт теоретической и экспериментальной биофизики Российской академии наук.

ООО "ИЦ КОМКОН".




Адрес редакции и реквизиты

199406, Санкт-Петербург, ул.Гаванская, д. 49, корп.2

ISSN 1999-6314

Российская поисковая система
Искать: 


ТОМ 5, СТ. 30 (стр. 121-125) //

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ОБЩЕТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТА ПЕРФТОРАН НА НЕПОЛОВОЗРЕЛЫХ ЖИВОТНЫХ

С.П.Рыбалкин, Н.Р.Дядищев, И.А.Гольцев, Ю.В.Иванова, М.Т.Бахтеев, О.А.Руднева, Н.В.Бодрова
Научно-исследовательский центр токсикологии и гигиенической регламентации биопрепаратов, г. Серпухов



Препарат перфторан предназначен для применения в качестве кровезаменителя с газотранспортной функцией. Он обладает полифункциональными свойствами: нормализует газообмен и метаболизм, транспортирует кислород и углекислый газ, стабилизирует клеточные мембраны, корригирует реологические свойства крови и расстройства микроциркуляции, нормализует центральную гемодинамику, обладает сорбционными и диуретическими свойствами.

Препарат разрешен в Российской Федерации для медицинского применения и промышленного выпуска (регистрационное удостоверение © 96/50/10). Однако препарат не проходил специальной регистрации для применения в педиатрической практике, Для такого расширения сферы применения требуется провести дополнительные исследования, в том числе и по разделу доклинических испытаний

Целью исследований, результаты которых представлены в данной работе, явилось экспериментальное изучение общетоксического действия препарата перфторан на неполовозрелых животных.

1. Материалы и методы

На исследования был представлен препарат перфторан, производства ОАО НПФ "Перфторан", серия 470901, срок годности до 09.2004 г. Препарат представлен в замороженном виде во флаконах по 100 мл общим объемом 2 литра.

Исследования проведены в соответствии с "Методическими указаниями по изучению общетоксического действия фармакологических веществ", изложенными в "Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ". М., ЗАО "ИИА "Ремедиум", 2000, с. 18-24.

Ёксперименты проводили на неполовозрелых инбредных крысах, мышах и кроликах породы шиншилла, полученных из Центрального питомника лабораторных животных РАМН (отделение УКрюковоФ). Содержание животных соответствовало санитарным правилам по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев), утвержденным МЗ СССР 06.07.73 г. Кормили животных натуральными и брикетированными кормами в соответствии с нормами, утвержденными приказом МЗ СССР ©755 от 12.08.77 г. Животные прошли карантин и акклиматизацию в условиях вивария в течение 14 дней. Ёкспериментальные группы животных формировали методом случайной выборки с учетом массы тела в качестве определяющего показателя. При проведении экспериментов ежедневно наблюдали за общим состоянием животных, потреблением корма и воды; один раз в неделю определяли массу тела.

Клинические анализы крови крыс проводили по стандартным методикам. Биохимические показатели сыворотки крови определяли следующими унифицированными методами: общий белок - биуретовым, глюкозу - глюкозооксидазным, мочевину ‑ уреазным/фенол-гипохлорит-ным, креатининметодом яффе с депротеинизацией, холестеринэнзиматическим колориметрическим методом, аспартат-аминотрансферазу (АсАТ) и аланинаминотрансферазу (АлАТ)унифицированным методом Райтмана-Френкеля, щелочную фосфатазу унифицированным методом с нитрофенилфосфатом, общий билирубин ‑ методом Ендрассика-Грофа (наборы реактивов фирмы УOlvex DiagnosticumФ, Россия).

При анализе мочи белок в пробах определяли по методу Лоури, глюкозу - модифицированным глюкозооксидазным методом, мочевины - с помощью унифицированного  метода по  цветной реакции с диацетилмонооксимом, используя стандартный набор реактивов АО "Реагент" (Днепропетровск). Концентрацию ионов натрия и калия измеряли с помощью ионселективных электродов методом калибровочных кривых. Полуколичественное определение содержания кетоновых тел, уробилиногена, билирубина и рН проводили в свежих образцах мочи с помощью индикаторных бумажных тестов производства фирмы "Lachema"(Чехия).

Кусочки органов животных фиксировали в 10%-ном растворе формалина, после стандартной проводки через спирты заливали парафином и приготавливали срезы толщиной 5-6 мкм. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином и заключали в канадский бальзам. Анализ гистологических препаратов проводили под световым микроскопом.

Статистическую обработку результатов исследований проводили стандартными параметрическими методами.

Конкретные условия проведения отдельных экспериментов приве-дены в соответствующих разделах главы "Результаты исследований" 2. Результаты исследований 2.1. Результаты изучения острой токсичности перфторана

Острую токсичность перфторана определяли путем внутрибрюшинного введения аутбредным мышам. Использовали 2 группы мышей: с массой тела 12-14 г (неполовозрелые) и 22-24 г (взрослые). Каждой группе перфторан вводили в дозах 273, 182 или 91 мл/кг массы тела. В группу брали по 6 мышей. Каждую дозу препарата вводили за 6 приемов с интервалом 1 час, поскольку внутрибрюшинный способ введения имеет свои ограничения по объему однократно вводимой дозы.

При наблюдении в течение многократных введений препарата, мыши обеих групп не проявляли сколько-нибудь заметных признаков интоксикации. Через 24 часа после последнего введения, у мышей, как неполовозрелых, так и взрослых, получивших максимальную дозу препарата, отмечены признаки угнетения центральной нервной системы, отказ от корма и воды. К исходу вторых суток пало 4 взрослых мыши и 5 неполовозрелых, из числа получивших максимальную дозу, и 1 и 3 мыши соответственно из числа получивших среднюю дозу перфторана. В группах животных, получивших минимальную дозу перфторана, гибели не было, и у животных отсутствовали признаки интоксикации. При вскрытии трупов павших животных отмечены признаки нарушения гемодинамики в паренхиматозных органах.

Дальнейшее наблюдение за животными вели в течение 2 недель. При этом не было отмечено каких-либо патологических реакций, в том числе и у выживших после воздействия максимальной и средней доз перфторана.

По результатам острого эксперимента, средние летальные дозы (ЛД50) препарата перфторан, определенные методом пробитов, составили для взрослых мышей 239 мл/кг, для неполовозрелых ¾ 183 мл/кг. 2.2. Результаты изучения общетоксического действия перфторана при повторных многократных введениях

2.2.1. Результаты изучения общетоксического действия перфторана при трехкратном внутрибрюшинном введении неполовозрелым крысам

В данном эксперименте перфторан вводили неполовозрелым крысам внутрибрюшинно в дозе по 30 мл на кг массы тела в течение трех дней подряд. Животным контрольной группы внутрибрюшинно вводили 0,85%-ный раствор хлорида натрия. Лабораторные исследования проводили в три срока: через сутки после последнего введения перфторана, через две недели и через 1 месяц. В каждый срок исследованию подвергали по 8 животных каждой из групп.

При внутрибрюшинном введении перфторана не было отмечено каких-либо изменений клинического состояния животных как непосредственно после введения препарата, так и на протяжении всего периода наблюдения. Во все сроки наблюдения животные были активны, потребление корма и воды соответствовало физиологической норме, динамика массы тела также была положительной (таблица 1).
Таблица 1. Динамика  массы тела белых крыс в эксперименте при трехкратном внутрибрюшинном введении перфторана

Препарат, доза Масса тела (г) в срок исследования
Начальный вес 1-я неделя 2-я неделя 3-я неделя 4-я неделя
САМЦЫ
Перфторан, 30 мл/кг 85,4±4,1 97,2±7,5 122,9±9,2 142,7±8,7 159,1±12,4
Контроль 87,3±4,0 107,5±8,2 128,7±6,2 145,3±9,6 164,3±10,4
САМКИ
Перфторан, 30 мл/кг 82,3±2,6 98,2±6,1 117,4±5,6 134,8±4,0 145,0±7,5
Контроль 79,4±2,7 102,5±5,3 118,3±4,2 137,2±7,9 146,9±10,8

Результаты клинических лабораторных исследований через сутки после последнего введения перфторана

Анализ показателей периферической крови через сутки после последнего введения перфторана (суммарная доза 90 мл на кг) не выявил изменений (таблицы 2 и 3).

При анализе биохимических показателей сыворотки крови был обнаружен ряд изменений (таблицы 4 и 5). Так, у самцов крыс достоверно увеличена концентрация глюкозы и снижена концентрация мочевины. У самок достоверно увеличены концентрация глюкозы и креатинина, снижены концентрация общего белка и мочевины, а также повышена активность щелочной фосфатазы.

Биохимические показатели мочи крыс через сутки после третьего введения перфторана не претерпевали изменений (таблицы 6 и 7).

При патологоанатомическом исследовании, проведенном через сутки после последнего (третьего) введения перфторана крысам (суммарная доза 90 мл на кг массы тела), у животных подопытной группы  обращали на себя внимание измененные размеры и внешний вид печени и селезенки. Печень была увеличена в размерах, светло-коричневого цвета, капсула гладкая, напряженная, края органа притуплены, паренхима на разрезе темноЦкрасная, полнокровная. Селезенка Ц увеличена в размерах, капсула напряжена, пульпа темноЦвишневого цвета. Массовые коэффициенты печени и селезенки крыс, получавших перфторан, имели статистически значимые различия по сравнению с контролем как у самцов, так и у самок (таблица 8).

Таблица 2. Гематологические показатели самцов крыс через 24 часа после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан, 30 мл/кг


Показатель, ед. измерения

Препарат

Физ.р-р

Перфторан

Гемоглобин, ммоль/дм3

11,1±0,3

11,2±0,2

Ёритроциты, млн/мм3

6,0±0,2

6,0±0,2

Гематокрит, %

45,9±1,2

43,5±0,9

Ср.объем эритр., мкм3

77,0±2,0

73,0±0,8

Ретикулоциты, %

3,5±0,3

3,3±0,2

Тромбоциты, тыс.

482±17

457±21,7

Вр.свертываемости, с

223±8,8

237±8,8

СОЁ, мм/час

2,7±0,7

3,3±0,3

Лейкоц., тыс/мм3, в т.ч.:

12,0±1,2

13,7±1,4

Базофилы, %

0,3±0,3

0,7±0,7

Ёозинофилы, %

2,7±1,3

2,7±1,3

ёные, %

0

0

Палочкоядерные, %

1,0±0,6

0,7±0,7

Сегментоядерные, %

27,7±1,2

32,7±3,3

Лимфоциты, %

61,3±2,3

58,0±5,0

Моноциты, %

7,0±1,5

5,3±0,7


Таблица 3. Гематологические показатели самок крыс через 24 часа после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан в дозе 30 мл/кг


Показатель, ед. измерения

Препарат

Физ. р-р

Перфторан

Гемоглобин, ммоль/дм3

11,1±0,1

11,4±0,1

Ёритроциты, млн/мм3

6,0±0,1

6,0±0,1

Гематокрит, %

46,4±1,4

43,9±0,6

Ср.объем эритроцита, мкм3

77,0±3,1

72,8±0,7

Ретикулоциты, %

3,4±0,2

3,3±0,2

Тромбоциты, тыс.

488±13

452±30

Вр.свертываемости, с

216,7±12,0

270,0±45,8

СОЁ, мм/час

3,3±0,3

3,0±0,6

Лейкоциты, тыс/мм3, в т.ч.:

12,2±1,5

10,3±0,9

Базофилы, %

0

0,3±0,3

Ёозинофилы, %

3,3±1,8

4,0±1,2

ёные, %

0

0

Палочкоядерные, %

1,3±0,7

0,7±0,7

Сегментоядерные, %

24,3±1,2

34,0±4,0

Лимфоциты, %

65,3±0,9

54,3±5,0

Моноциты, %

5,7±1,2

7,3±0,7




Таблица 4. Биохимические показатели сыворотки крови самцов крыс через 24 часа после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан в дозе 30 мл/кг


Показатель, ед. измерения

Препарат

Физ. р-р.

Перфторан

Общий белок, г/л

56,67±0,83

64, 44±4,01

Глюкоза, ммоль/л

6,45±0,20

9,29±0,41*

Мочевина, мкмоль/л

5,70±0,15

4,16±0,40*

Холестерин, ммоль/л

1,65±0,22

1,62±0,43

Креатинин, мкмоль/л

76,63±5,93

66,87±5,20

АлАТ, Е/л

25,30±4,29

24,30±1,85

АсАТ, Е/л

23,01±1,05

24,93±0,36

Щелочная фосфатаза Е/л

46,73±3,08

53,56±8,24

Билирубин, мкмоль/л

29,33±1,45

29,76±2,00


Примечание: знаком * помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных
Таблица 5. Биохимические показатели сыворотки крови самок крыс через 24 часа после
трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан


Показатель, ед. измерения

Препарат, доза

Контроль

Перфторан, 30 мл/кг

Общий белок, г/л

61,00±1,53

54,45±1,11*

Глюкоза, ммоль/л

6,54±0,38

8,57±0,41*

Мочевина, мкмоль/л

6,97±1,02

4,05±0,31*

Холестерин, ммоль/л

2,09±0,19

2,53±0,56

Креатинин, мкмоль/л

73,17±1,80

92,43±3,93*

АлАТ, Е/л

28,67±0,67

33,56±3,21

АсАТ, Е/л

26,94±2,34

27,10±0,96

Щелочная фосфатаза Е/л

39,83±1,74

67,24±4,76*

Билирубин, мкмоль/л

30,18±1,09

29,76±3,30


Примечание: знаком * помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных
Таблица 6. Биохимические показатели мочи самцов крыс через 24 часа после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан


Исследуемые показатели,

Препарат, доза

единицы измерения

Контроль

Перфторан, 30 мл/кг

Белок, г/л

0,65±0,19

0,77±0,22

Мочевина, ммоль/л

415±49

383±49

Глюкоза, ммоль/л

<6

<6

Калий, г/л

2,23±0,24

2,34±0,45

Натрий, г/л

0,37±0,16

0,49±0,14

Уробилиноген, мкмоль/л

<17

<17

рН

6,4±0,5

6,3±0,52

Билирубин, мкмоль/л

<5

<5

Кетоновые тела,ммоль/л

<1

<1




Таблица 7. Биохимические показатели крови самок крыс через 24 часа после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан


Исследуемые показатели,

Препарат, доза

единицы измерения

Контроль

Перфторан, 30 мл/кг

Белок, г/л

0,54±0,16

0,43±0,15

Мочевина, ммоль/л

411±56

373±45

Глюкоза, ммоль/л

<6

<6

Калий, г/л

2,14±0,45

2,21±0,57

Натрий, г/л

0,61±0,19

0,66±0,29

Уробилиноген, мкмоль/л

<17

<17

рН

6,4±0,52

6,3±0,55

Билирубин, мкмоль/л

<5

<5

Кетоновые тела,ммоль/л

<1

<1


 Таблица 8. Массовые коэффициенты органов белых крыс через сутки после трехкратного внутрибрюшинного введения перфторана

Препарат Сердце Легкие Печень Селезенка Почки Семенники
САМЦЫ
Перфторан, 30 мл/кг 2,7 ± 0,1 8,7 ± 0,7 69,2±5,7* 7,2 ± 1,8* 7,2±0,7 10,9 ± 0,6
Контроль 2,8 ± 0,1 7,9 ± 0,6 46,2 ± 1,7 3,6 ± 0,7 6,0 ± 0,2 9,7 ± 0,5
САМКИ
Перфторан, 30 мл/кг, 3,1 ± 0,3 8,5 ± 0,8 71,4±4,2* 6,6±1,0* 8,1 ± 0,2 -
Контроль 3,0 ± 0,2 8,1 ± 0,7 51,2 ± 2,1 3,0 ± 0,5 7,3 ± 0,8 -



Примечание: знаком * помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных


Остальные органы подопытных животных не имели каких-либо отличий от контрольных.

Микроскопическому   исследованию  подвергали   гистологические     препараты сердца, легких, паратрахеальных лимфатических узлов, печени, селезенки и почек.

Микроскопическая структура органов животных в контрольной группе соответствовала норме. Микроскопические изменения в органах неполовозрелых крыс, получавших перфторан, носили характер выраженной макрофагальной реакции и соответствовали   следующему описанию.

Легкие межальвеолярные перегородки утолщены, в них определяются единичные макрофаги, содержащие <глыбки> перфторорганических соединений (ПФОС), имеют место признаки венозного полнокровия артерий и вен.  Паратрахеальные лимфоузлы ¾ структура органа сохранена, на фоне лимфоцитов определяются единичные макрофаги, содержащие ПФОС. Печень ¾ структура органа сохранена, в перипортальных прослойках встречаются единичные макрофаги, содержащие ПФОС. Селезенка Ц отмечаются скопления групп макрофагов, содержащих ПФОС в красной пульпе. Лимфоидные фолликулы белой  пульпы   содержат единичные макрофаги, также содержащие ПФОС. Почки Ц в сосудистых клубочках коркового вещества встречаются единичные макрофаги, содержащие ПФОС. Ёпителий проксимальных и дистальных канальцев не изменен.

Каких-либо других эффектов, кроме вышеописанных, через сутки после последнего введения перфторан не вызывал. Результаты клинических лабораторных исследований через две недели после последнего введения перфторана

Через две недели после трехкратного внутрибрюшинного введения перфторана крысам (суммарная доза 90 мл на кг), как и через сутки, не отмечено изменения показателей периферической крови и биохимических показателей мочи (таблицы 9-12).
Таблица 9. Гематологические показатели самцов крыс через 2 недели после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан


Показатель, ед. измерения

Препарат, доза

Контроль

Перфторан, 30 мл/кг

Гемоглобин, ммоль/дм3

11,2±0,1

11,4±0,1

Ёритроциты, млн/мм3

6,1±0,1

6,1±0,1

Гематокрит, %

47,7±0,9

47,6±0,9

Ср.объем эритр., мкм3

78,6±0,7

77,7±0,6

Ретикулоциты, %

3,6±0,1

3,4±0,2

Тромбоциты, тыс.

483±20

469±19

Вр.свертываемости, с

220±5,8

218±10,9

СОЁ, мм/час

3,0±0,6

3,0±0,6

Лейкоц., тыс/мм3, в т.ч.:

11,8±0,8

14,4±2,0

Базофилы, %

0,3±0,3

0

Ёозинофилы, %

3,0±1,5

3,3±0,7

ёные, %

0

0

Палочкоядерные, %

1,0±0,6

2,7±0,7

Сегментоядерные, %

27,3±0,9

29,3±1,8

Лимфоциты, %

62,7±1,9

59,0±0,6

Моноциты, %

7,7±0,3

5,7±1,2




Таблица 10. Гематологические показатели самок крыс через 2 недели после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан


Показатель, ед. измерения

Препарат, доза

Контроль

Перфторан, 5 мл

Гемоглобин, ммоль/дм3

11,0±0,1

11,5±0,2

Ёритроциты, млн/мм3

5,9±0,1

6,2±0,1

Гематокрит, %

45,8±2,0

46,2±0,9

Ср.объем эритроцита, мкм3

78,1±2,2

74,0±0,4

Ретикулоциты, %

3,5±0,2

3,4±0,3

Тромбоциты, тыс.

482±16

472±26

Вр.свертываемости, с

221,7±10,1

196,7±8,8

СОЁ, мм/час

3,3±0,3

3,3±0,3

Лейкоциты, тыс/мм3, в т.ч.:

11,8±0,7

17,6±2,6

Базофилы, %

0

0,3±0,3

Ёозинофилы, %

3,0±1,5

3,0±1,0

ёные, %

0

0

Палочкоядерные, %

1,3±0,7

1,3±0,7

Сегментоядерные, %

25,7±1,5

24,7±2,9

Лимфоциты, %

63,3±0,7

63,3±3,7

Моноциты, %

6,7±0,7

7,3±0,7


Таблица 11. Биохимические показатели мочи самцов крыс через 2 недели после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан


Исследуемые показатели,

Препарат, доза

единицы измерения

Контроль

Перфторан, 30 мг/кг

Белок, г/л

1,01±0,27

0,87±0,32

Мочевина, ммоль/л

336±59

363±44

Глюкоза, ммоль/л

<6

<6

Калий, г/л

2,27±0,43

2,45±0,65

Натрий, г/л

0,45±0,11

0,47±0,12

Уробилиноген, мкмоль/л

<17

<17

рН

6,3±0,53

6,3±0,57

Билирубин, мкмоль/л

<5

<5

Кетоновые тела,ммоль/л

<1

<1


Таблица 12. Биохимические показатели мочи самок крыс через 2 недели после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан


Исследуемые показатели,

Препарат, доза

единицы измерения

Контроль

Перфторан, 30 мг/кг

Белок, г/л

0,51±0,17

0,44±0,12

Мочевина, ммоль/л

391±48

353±59

Глюкоза, ммоль/л

<6

<6

Калий, г/л

1,94±0,77

2,1±0,6

Натрий, г/л

0,53±0,21

0,61±0,27

Уробилиноген, мкмоль/л

<17

<17

рН

6,3±0,6

6,3±0,6

Билирубин, мкмоль/л

<5

<5

Кетоновые тела,ммоль/л

<1

<1




Через 2 недели после введения перфторана (суммарная доза 90 мл на кг) отмечены изменения отдельных биохимических показателей сыворотки крови (таблицы 13 и 14). У самцов была увеличена концентрация общего белка, глюкозы и холестерина, повышена активность АлАТ и щелочной фосфатазы. У самок увеличена концентрация глюкозы и холестерина и снижена концентрация белка.
Таблица 13. Биохимические показатели сыворотки крови самцов крыс через 2 недели после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан


Показатель, ед. измерения

Препарат, доза

Контроль

Перфторан, 30 мл/кг

Общий белок, г/л

58,50±1,26

67,78±1,11*

Глюкоза, ммоль/л

6,54±0,23

9,52±0,48*

Мочевина, мкмоль/л

5,72±0,10

5,09±0,42

Холестерин, ммоль/л

1,58±0,18

4,15±0,55*

Креатинин, мкмоль/л

77,97±9,01

76,70±9,01

АлАТ, Е/л

25,67±3,38

46,52±1,85*

АсАТ, Е/л

25,52±0,75

27,83±1,09

Щелочная фосфатаза Е/л

41,64±2,30

67,24±4,76*

Билирубин, мкмоль/л

31,42±2,35

36,58±17,13


Примечание: знаком * помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных
Таблица 14. Биохимические показатели сыворотки крови самок крыс через 2 недели после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан


Показатель, ед. измерения

Препарат, доза

Контроль

Перфторан, 30 мл/кг

Общий белок, г/л

60,17±0,44

52,22±2,94*

Глюкоза, ммоль/л

6,51±0,36

10,24±0,86*

Мочевина, мкмоль/л

6,00±0,06

5,43±0,31

Холестерин, ммоль/л

1,94±0,13

4,20±0,37*

Креатинин, мкмоль/л

72,27±0,93

74,73±10,95

АлАТ, Е/л

27,81±3,05

33,67±3,21

АсАТ, Е/л

24,71±1,26

23,12±1,45

Щелочная фосфатаза Е/л

40,50±1,50

43,31±7,40

Билирубин, мкмоль/л

32,03±2,00

32,03±4,01


Примечание: знаком * помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных

При патологоанатомическом исследовании, проведенном через две недели после трехкратного введения перфторана крысам (суммарная доза 90 мл на кг) у самок и самцов  подопытной группы размеры и масса печени и селезенки превышали таковые у контроля (таблица 15), а у самцов, кроме того, отмечено увеличение массового коэффициента почек.
Таблица 15. Массовые коэффициенты внутренних органов белых крыс через две недели после трехкратного внутрибрюшинного введения перфторана

Препарат, доза Сердце Легкие Печень Селезенка Почки Семенники
САМЦЫ
Перфторан, 30 мл/кг 3,1 ± 0,3 3,1 ± 0,3 75,1±3,6* 6,5 ± 0,9* 8,2±0,2* 9,4 ± 1,8
Контроль 3,0 ± 0,4 7,4 ± 0,8 44,6 ± 4,2 3,2 ± 0,3 6,0 ± 0,2 9,1 ± 2,0
САМКИ
Перфторан, 30 мл/кг, 3,5 ± 0,4 8,6 ± 0,9 70,5±4,1* 8,2±0,1* 7,4 ± 0,4 -
Контроль 3,1 ± 0,4 8,3 ± 0,7 50,8 ± 1,6 3,1 ± 0,4 7,2 ± 0,4 -


Примечание: знаком * помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных

При макроскопическом исследовании печени установлено значительное напряжение ее капсулы, края долей закруглены, паренхима на разрезе бледно-коричневая, соскоб значительный. Селезенка имела по краям белесый оттенок, капсула напряжена, пульпа бледноЦвишневого цвета, соскоб значительный.

Микроскопические изменения в органах белых крыс в этот период также носили характер макрофагальной реакции, но по сравнению с первым сроком исследования были  гораздо более выраженными и соответствовали   следующему  описанию.

Легкие в утолщенных межальвеолярных перегородках и просветах альвеол в значительном количестве определяются макрофаги, содержащие ПФОС; в перибронхиальных инфильтратах также имеются скопления макрофагов с ПФОС. Паратрахеальные лимфоузлы ‑ в фолликулах обнаруживаются крупные скопления макрофагов с ПФОС. Печень наблюдается дискомплексация печеночных долек за счет межтрабекулярных скоплений групп макрофагов и купферовских клеток, содержащих ПФОС. Селезенка красная пульпа обильно инфильтрирована макрофагами, содержащими ПФОС, а так же содержит значительное количество моноцитов, эозинофилов и нейтрофильных лейкоцитов. Фолликулы  белой  пульпы уменьшены в размерах. Большое число венозных синусов не содержит крови. Почки в клубочках коркового вещества встречаются единичные макрофаги, содержащие ПФОС. Ёпителий проксимальных и дистальных канальцев не изменен.

Таким образом, через две недели, как и через сутки после последнего введения перфторана, в органах подопытных животных, наблюдается макрофагальная реакция, причем более выраженная, чем в первый срок исследования.
Результаты клинических лабораторных исследований через месяц после последнего введения перфторана.

Через месяц после последнего введения препарата перфторан (суммарная доза 90 мл на кг) у подопытных крыс не обнаружено каких-либо изменений показателей периферической крови и мочи
(таблицы 16-19).
Таблица 16. Гематологические показатели самцов крыс через 1 месяц после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан


Показатель, ед. измерения

Препарат, доза

Контроль

Перфторан, 30 мл/кг

Гемоглобин, ммоль/дм3

11,1±0,3

11,2±0,2

Ёритроциты, млн/мм3

6,0±0,3

6,2±0,2

Гематокрит, %

47,9±1,0

47,8±1,8

Ср.объем эритр., мкм3

80,0±2,0

77,9±0,5

Ретикулоциты, %

3,4±0,3

3,5±0,2

Тромбоциты, тыс.

470±26

432±33,8

Время свертываемости, с

207±14,5

213±8,8

СОЁ, мм/час

2,7±0,3

2,3±0,3

Лейкоц., тыс/мм3, в т.ч.:

11,6±1,3

17,2±5,2

Базофилы, %

0,3±0,3

0

Ёозинофилы, %

3,0±1,5

3,7±0,9

ёные, %

0

0

Палочкоядерные, %

0,7±0,7

1,7±0,9

Сегментоядерные, %

27,3±2,4

31,3±2,4

Лимфоциты, %

61,7±1,9

56,7±2,4

Моноциты, %

7,0±1,0

6,7±0,9


Таблица 17. Гематологические показатели самок крыс через 1 месяц после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан


Показатель, ед. измерения

Препарат, доза

Контроль

Перфторан, 5 мл

Гемоглобин, ммоль/дм3

11,1±0,2

11,2±0,4

Ёритроциты, млн/мм3

5,8±0,1

6,2±0,3

Гематокрит, %

47,5±0,9

48,2±2,3

Ср.объем эритроцита, мкм3

76,3±1,4

78,2±0,8

Ретикулоциты, %

3,3±0,2

3,5±0,3

Тромбоциты, тыс.

492±17

482±23

Время свертываемости, с

203,3±14,5

210±40,4

СОЁ, мм/час

3,3±0,3

2,7±03

Лейкоциты, тыс/мм3, в т.ч.:

13,2±1,5

14,4±3,6

Базофилы, %

0

0,3±0,3

Ёозинофилы, %

3,3±1,8

4,0±1,2

ёные, %

0

0

Палочкоядерные, %

1,7±0,9

1,3±0,7

Сегментоядерные, %

24,0±2,0

25,3±1,8

Лимфоциты, %

66,0±0,0

62,7±0,7

Моноциты, %

5,0±0,6

5,7±1,7


Таблица 18. Биохимические показатели мочи самцов крыс через 1 месяц после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан


Исследуемые показатели,

Препарат, доза

единицы измерения

Контроль

Перфторан, 30 мл/кг

Белок, г/л

0,61±0,11

0,64±0,08

Мочевина, ммоль/л

397±48

404±39

Глюкоза, ммоль/л

<6

<6

Калий, г/л

3,34±1,1

3,45±1,5

Натрий, г/л

1,21±0,35

1,11±0,46

Уробилиноген, мкмоль/л

<17

<17

РН

6,3±0,53

6,3±0,54

Билирубин, мкмоль/л

<5

<5

Кетоновые тела,ммоль/л

<1

<1


Таблица 19. Биохимические показатели мочи самок крыс через 1 месяц после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан


Исследуемые показатели,

Препарат, доза

единицы измерения

Контроль

Перфторан, 30 мл/кг

Белок, г/л

0,27±0,14

0,29±0,11

Мочевина, ммоль/л

272±57

252±49

Глюкоза, ммоль/л

<6

<6

Калий, г/л

1,77±0,56

1,75±0,6

Натрий, г/л

0,57±0,193

0,69±0,23

Уробилиноген, мкмоль/л

<17

<17

РН

6,6±0,45

6,7±0,45

Билирубин, мкмоль/л

<5

<5

Кетоновые тела,ммоль/л

<1

<1


Изменение биохимических показателей сыворотки крови отмечено лишь у самцов и выражалось оно в увеличении концентрации белка и глюкозы (таблица 20). У подопытных самок, по сравнению с контрольными, статистически достоверные изменения отсутствовали (таблица 21).
Таблица 20. Биохимические показатели сыворотки крови самцов крыс через 1 месяц после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан


Показатель, ед. измерения

Препарат, доза

Контроль

Перфторан, 30 мл/кг

Общий белок, г/л

58,33±1,17

65,33±2,33*

Глюкоза, ммоль/л

6,49±0,18

8,07±0,46*

Мочевина, мкмоль/л

5,67±0,12

6,01±0,58

Холестерин, ммоль/л

1,64±0,23

1,94±0,15

Креатинин, мкмоль/л

78,67±7,87

76,70±5,90

АЛАТ, Е/л

26,15±4,90

28,00±3,21

АСАТ, Е/л

22,03±2,02

19,86±3,10

Щелочная фосфатаза Е/л

42,45±3,08

45,87±2,56

Билирубин, мкмоль/л

29,76±2,00

36,58±2,00



Примечание: знаком * помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных

Таблица 21. Биохимические показатели сыворотки крови самок крыс через 1 месяц после трехкратного внутрибрюшинного введения препарата перфторан




Показатель, ед. измерения

Препарат, доза

Контроль

Перфторан, 30 мл/кг

Общий белок, г/л

63,00±2,02

66,50±2,02

Глюкоза, ммоль/л

6,67±0,46

6,67±0,35

Мочевина, мкмоль/л

7,05±0,99

7,17±0,46

Холестерин, ммоль/л

2,02±0,22

2,11±0,22

Креатинин, мкмоль/л

72,77±1,97

74,73±10,95

АлАТ, Е/л

26,15±1,85

24,30±4,90

АсАТ, Е/л

26,74±2,51

23,12±1,92

Щелочная фосфатаза Е/л

39,03±2,26

37,32±8,15

Билирубин, мкмоль/л

32,79±1,52

35,82±4,73


При патологоанатомическом исследовании, проведенном через один месяц после последнего введения перфторана крысам (суммарная доза 90 мл на кг), у животных контрольной группы анатомическое расположение и структура внутренних органов соответствовали норме. У крыс подопытной группы  в этот срок исследования внешний вид, размеры и макроскопическая структура внутренних органов визуально уже не отличались от контрольных. Тем не менее, у самцов крыс массовые коэффициенты печени и почек крыс, получавших перфторан, имели статистически значимые различия по сравнению с контролем (табл. 22). У самок различия отсутствовали.
Таблица 22. Массовые коэффициенты внутренних органов белых крыс через 1 месяц после трехкратного внутрибрюшинного введения перфторана

Препарат Сердце Легкие Печень Селезенка Почки Семенники
САМЦЫ
Перфторан, 30 мл/кг, 3,5 ± 0,2 7,8 ± 0,1 59,9±1,8* 4,4 ± 0,5 8,4±0,7* 10,3 ± 0,2
Контроль, 2,9 ± 0,1 7,1 ± 1,6 48,3 ± 3,4 3,5 ± 0,6 5,9 ± 0,4 9,4 ± 0,5
САМКИ
Перфторан, 30 мл/кг, 3,3 ± 0,4 7,5 ± 0,4 57 ± 3,4 5,3 ± 1,1 7,1 ± 0,3 -
Контроль 3,2 ± 0,4 8,4 ± 0,9 53,5 ± 1,9 3,0 ± 0,4 7,1 ± 0,6 -



Примечание: знаком * помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных
При микроскопическом изучении препаратов внутренних органов крыс контрольной группы установлена нормальная гистологическая картина. В органах животных подопытной группы, как и в предыдущие сроки исследования, имела место макрофагальная реакция. Однако интенсивность ее проявления в отдельных органах носила несколько иной характер. Так, в легких, в утолщенных межальвеолярных перегородках, встречались единичные макрофаги, содержащие ПФОС, в просвете альвеол они отсутствовали; периваскулярно определялась лейкоцитарная инфильтрация. В паратрахеальных лимфоузлах также отсутствовали крупные скопления макрофагов с ПФОС, а встречались лишь единичные. В печени макрофаги обнаруживались лишь в виде отдельных узелков, причем содержание ПФОС в их цитоплазме визуально было меньше, чем в предыдущие сроки исследования. В сосудистых клубочках  почек, как у самок, так и у самцов, изредка определялись единичные макрофаги, содержащие ПФОС. То есть, в целом отмечался спад макрофагальной активности, связанный с уменьшением концентрации П0ФОС в указанных органах. И, напротив, в селезенке подопытных крыс отмечено резкое нарастание количества макрофагов, содержаших ПФОС в красной пульпе. Переполнение красной пульпы привело к деформации и сдавливанию лимфатических фолликулов. То есть, через месяц после последнего введения, перфторорганические соединения большей частью депонировались в селезенке. 2.2.2. Результаты изучения общетоксического действия перфторана при ежедневном внутрибрюшинном введении неполовозрелым крысам в течение 2 недель

Данный эксперимент проведен для установления токсических эффектов, которые могут быть вызваны введением перфторана в объеме, превышающем объем максимальной терапевтической дозы, а также при увеличении кратности введения препарата.

Перфторан вводили неполовозрелым крысам внутрибрюшинно в дозе по 50 мл/кг массы тела в течение четырнадцати дней подряд (суммарная доза 700 мл на кг). Животным контрольной группы внутрибрюшинно вводили 0,85%-ный раствор хлорида натрия. В каждой группе было по 8 самцов и 8 самок. Лабораторные исследования проводили через сутки после последнего введения препарата.

При наблюдении за животными, с 3-го дня эксперимента было отмечено снижение потребления корма крысами, получавшими перфторан, что привело к снижению темпов прироста массы тела у животных этой группы (таблица 23). Не было отмечено сколько-нибудь существенных отклонений в клиническом состоянии животных, за исключением некоторого снижения двигательной активности. Как у подопытных, так и у контрольных животных наблюдалось снижение потребности в питьевой воде, поскольку ее потребление компенсировалось инъекцией.

Таблица 23. Динамика массы тела крыс в эксперименте при ежедневном внутрибрюшинном  введении перфторана в течение 14 дней


Препарат, доза

Масса тела (г) в срок исследования

Начальный вес

1 неделя

2 недели

САМЦЫ

Перфторан, 50 мл/мг

85±3,9

96±3,3*

108±5,9*

Контроль

83±1,1

105±2,9

124±3,3

САМКИ

Перфторан, 50 мл/мг

78±2,9

87±4,7

101±7,6*

Контроль

79±3,3

99±4,2

117±4,8


Примечание: знаком * помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных

Введение перфторана неполовозрелым крысам в течение 14 дней в дозе по 50 мл/кг массы тела вызвало изменение ряда показателей периферической крови (таблицы 24 и 25). Увеличение таких показателей как гематокрит и средний объем эритроцита очевидно связано со специфической газотранспортной функцией перфторана. Повышенное количество лейкоцитов является ответной реакцией на введение большого объема препарата. Следует отметить, что большее количество изменений обнаружено в периферической крови самок.

Изменения биохимических показателей сыворотки крови были однотипны как для самок, так и для самцов (таблицы 26 и 27). У крыс, получавших перфторан, достоверно снижена концентрация глюкозы, увеличена концентрация холестерина, активность аланинаминотрансферазы и щелочной фосфатазы.
Таблица 24. Гематологические показатели самцов крыс после ежедневного внутрибрюшинного введения препарата перфторан в течение 14 дней


Показатель, ед. измерения

Препарат, доза

Контроль

Перфторан, 50 мл/кг

Гемоглобин, ммоль/дм3

10,3±0,1

10,6±0,1

Ёритроциты, млн/мм3

5,4±0,1

5,5±0,1

Гематокрит, %

44,4±1,1

48,5±0,5*

Ср.объем эритр., мкм3

82,8±0,9

88,8±1,3*

Ретикулоциты, %

3,1±0,3

3,1±0,2

Тромбоциты, тыс.

365±18

338±24

Время свертываемости, с

303±18

201±6,8*

СОЁ, мм/час

1,6±0,2

3,0±0,3*

Лейкоциты, тыс/мм3, в т.ч.:

18,7±3,1

33,2±1,5*

Базофилы, %

0

0,2±0,2

Ёозинофилы, %

2,0±1,0

2,8±0,9

ёные, %

0

0

Палочкоядерные, %

1,0±0,6

1,0±0,3

Сегментоядерные, %

30,4±1,2

36,8±3,1

Лимфоциты, %

61,0±2,2

49,2±3,6*

Моноциты, %

7,2±1,0

9,8±0,9



Примечание: знаком * помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных

Таблица 25. Гематологические показатели самок крыс после ежедневного внутрибрюшинного введения препарата перфторан в течение 14 дней


Показатель, ед. измерения

Препарат, доза

Контроль

Перфторан, 50 мл/кг

Гемоглобин, ммоль/дм3

10,3±0,1

10,8±0,1*

Ёритроциты, млн/мм3

5,3±0,1

5,8±0,1*

Гематокрит, %

43,7±0,9

52,2±1,8*

Ср.объем эритроцита, мкм3

82,7±1,0

89,9±2,4*

Ретикулоциты, %

3,1±0,2

3,1±0,2

Тромбоциты, тыс.

329±29

337±22

Время свертываемости, с

289±8,7

195±5,9*

СОЁ, мм/час

1,2±0,2

2,4±0,6

Лейкоциты, тыс/мм3, в т.ч.:

18,7±1,3

35,0±2,8*

Базофилы, %

0,2±0,2

0

Ёозинофилы, %

1,6±1,0

2,4±1,0

ёные, %

0

0

Палочкоядерные, %

0,8±0,5

1,2±0,8

Сегментоядерные, %

25,2±1,9

42,4±2,9*

Лимфоциты, %

64,6±3,2

45,2±2,6*

Моноциты, %

7,6±1,2

8,8±1,5



Примечание: знаком * помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных Таблица 26. Биохимические показатели сыворотки крови самцов крыс после ежедневного внутрибрюшинного введения препарата перфторан в течение 14 дней


Показатель, ед. измерения

Препарат

Контроль

Перфторан, 50 мл/кг

Общий белок, г/л

73,11±6,38

66,89±1,20

Глюкоза, ммоль/л

5,90±0,65

4,23±0,17*

Мочевина, мкмоль/л

5,75±0,62

6,50±0,59

Холестерин, ммоль/л

1,72±0,21

3,75±0,41*

Креатинин, мкмоль/л

104,38±1,76

104,38±12,30

АлАТ, Е/л

44,67±4,97

87,26±8,73*

АсАТ, Е/л

19,49±0,56

19,86±0,74

Щелочная фосфатаза Е/л

51,85±8,76

94,59±3,44*

Билирубин, ммоль/л

33,55±2,44

33,55±11,99


Примечание: знаком * помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных

Таблица 27. Биохимические показатели сыворотки крови самок крыс после ежедневного внутрибрюшинного введения препарата перфторан в течение 14 дней


Показатель, ед. измерения

Препарат

Контроль

Перфторан, 50 мл/кг

Общий белок, г/л

89,60±13,80

71,56±1,20

Глюкоза, ммоль/л

6,85±0,43

4,49±0,60*

Мочевина, мкмоль/л

5,08±0,22

6,79±1,11

Холестерин, ммоль/л

2,07±0,48

4,92±0,85*

Креатинин, мкмоль/л

104,84±7,01

99,85±4,65

АлАТ, Е/л

34,67±4,08

79,85±6,25*

АсАТ, Е/л

21,96±2,05

19,49±0,28

Щелочная фосфатаза Е/л

36,13±5,40

68,95±1,99*

Билирубин, ммоль/л

37,36±5,60

38,31±2,44



Примечание: знаком "*" помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных

Показатели мочи не претерпевали изменений под воздействием вводимого перфторана (таблицы 28 и 29).
Таблица 28. Биохимические показатели мочи самцов крыс после ежедневного внутрибрюшинного введения препарата перфторан в течение 14 дней


Исследуемые показатели,

Препарат, доза

единицы измерения

Контроль

Перфторан, 50 мл/кг

Белок, г/л

0,53±0,23

0,37±0,08

Мочевина, ммоль/л

362±100

274±83

Глюкоза, ммоль/л

<6

<6

Калий, г/л

4,57±2,3

3,5±1,5

Натрий, г/л

1,25±0,66

0,57±0,46

Уробилиноген, мкмоль/л

<17

<17

рН

6,4±0,55

6,2±0,54

Билирубин, мкмоль/л

<5

<5

Кетоновые тела,ммоль/л

<1

<1


Таблица 29. Биохимические показатели мочи самок крыс после ежедневного внутрибрюшинного введения препарата перфторан в течение 14 дней


Исследуемые показатели,

Препарат, доза

единицы измерения

Контроль

Перфторан, 50 мл/кг

САМКИ

Белок, г/л

0,43±0,13

0,28±0,15

Мочевина, ммоль/л

316±116

245±160

Глюкоза, ммоль/л

<6

<6

Калий, г/л

2,34±1,7

2,53±1,6

Натрий, г/л

0,58±0,5

1,02±0,63

Уробилиноген, мкмоль/л

<17

<17

рН

6,2±0,4

6,2±0,45

Билирубин, мкмоль/л

<5

<5

Кетоновые тела,ммоль/л

<1

<1


При патологоанатомическом исследовании, проведенном через одни сутки после окончания 14-дневного курса введения перфторана крысам в дозе по 50 мл/кг (суммарная доза 700 мл на кг), у подопытных животных отмечено резкое увеличение размеров и массы печени и селезенки по сравнению с контролем (табл.30). Кроме этого, как у самцов, так и у самок отмечено увеличение массового коэффициента почек, хотя разница с контролем статистически не достоверна.
Таблица 30. Массовые коэффициенты внутренних органов крыс через 14 дней ежедневного введения перфторана

Препарат, доза Сердце Легкое Печень Селезенка Почки Семенники
САМЦЫ
Перфторан, 50 мл/кг 3,1 ± 0,4 10,2 ± 0,4 168,7 ± 16,5* 22,8 ± 1,8* 7,9 ± 0,4 7,8 ± 1,1
Контроль 2,4 ± 0,7 7,1 ± 2,1 47,6 ± 13,5 2,9 ± 0,9 4,5 ± 1,2 7,6 ± 2,2
САМКИ
Перфторан 50 мл/кг 2,9 ± 0,4 10,5 ± 0,7 138,1± 21,4** 16,3 ± 3,9* 7,6 ± 0,5 -
Контроль 2,5 ± 0,7 6,7 ± 2,0 46,7 ± 13,7 3,9 ± 1,2 5,0 ± 1,4 -



Примечание: знаком * помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных
Печень имела бледно-коричневый цвет, напряженную капсулу и закругленные края долей. При надрезе капсулы паренхима выбухала за края разреза, соскоб паренхимы был обильным. Селезенка имела бледно-розовый цвет, капсула была напряжена, края закруглены. При надрезе капсулы паренхима выбухала за края разреза, соскоб паренхимы был обильным.

При микроскопическом исследовании препаратов внутренних органов, в легких, печени, селезенке, почках и паратрахеальных лимфатических узлах обнаруживалась обширная инфильтрация макрофагами, содержащими ПФОС. Особенно выражена эта реакция в печени и селезенке. Архитектоника этих органов значительно изменяется за счет деструкции элементов паренхимы, что, в свою очередь, ведет к функциональным изменениям при отсутствии видимых морфологических  изменений в паренхиматозных клетках.
2.2.3. Результаты изучения общетоксического действия перфторана при трехкратном внутривенном введении неполовозрелым кроликам
Перфторан вводили капельно пяти кроликам в краевую ушную вену в дозе 50 мл/кг со скоростью 2-3 мл в минуту. Инфузию осуществляли один раз в день в течение трех дней подряд. Пяти кроликам контрольной группы при тех же условиях вводили 0,85%-ный раствор хлорида натрия. Для проведения манипуляции животных фиксировали в специальном иммобилизирующем станке.
Во время первого введения перфторана, после того как была введена примерно половина объема дозы препарата, у одного из кроликов проявились признаки возбуждения, выразившиеся в пронзительных криках и стремлении освободиться от фиксации. Препарат продолжали вводить, и до окончания введения такие приступы возникали еще дважды. Продолжительность каждого из приступов составляла менее минуты. При последующих введениях у этого кролика, равно как и у всех других, отсутствовала сколько-нибудь выраженная реакция на введение перфторана.

Общий срок наблюдения за животными составил 14 дней, в течение которых у всех подопытных и контрольных кроликов клиническое состояние не выходило за пределы физиологической нормы, потребление корма и воды также соответствовали нормальным потребностям. Динамика массы тела в обеих группах была положительной, прирост равномерным (таблица 31).
Таблица 31. Динамика массы тела кроликов в эксперименте при внутривенном введении перфторана в течение 3 дней по  50 мл/кг.


Препарат

Масса тела (г) в срок исследования

Начальный вес

1 неделя

2 недели

Перфторан

1015±48,3

1150±20,6

1290±65,2


Контроль

1007±34,6

1159±41,8

1320±50,1


Взятие крови и мочи для проведения клинических анализов осуществляли через 24 часа после последнего введения перфторана и через 14 суток. Поскольку взятие материала для патоморфологического исследования через 24 часа не предполагалось, кровь у животных для биохимического анализа отбирали при помощи шприца из сердца в объеме 5 мл. Для гематологического анализа кровь брали из краевой ушной вены. Мочу отбирали катетером для мелких домашних животных.

Как через 24 часа после последнего введения перфторана, так и через 14 суток, не было отмечено изменений показателей периферической крови и мочи кроликов (таблицы 32-35).
Таблица 32. Гематологические показатели кроликов через 24 часа после трехкратного внутривенного введения препарата перфторан по  50 мл/кг.


Показатель, ед. измерения

Препарат

Контроль

Перфторан

Гемоглобин, ммоль/дм3

7,1±0,3

6,7±0,2

Ёритроциты, млн/мм3

3,7±0,2

3,5±0,1

Гематокрит, %

38,3±3,1

39,9±4,1

Ср.объем эритр., мкм3

102,3±3,3

112,4±7,0

Ретикулоциты, %

3,3±0,3

3,2±0,2

Тромбоциты, тыс.

232±13

238±25,2

Время свертываемости, с

297±8,8

295±15,3

СОЁ, мм/час

1,7±0,3

2,7±1,2

Лейкоц., тыс/мм3, в т.ч.:

6,4±0,7

8,6±1,1

Базофилы, %

0

0

Ёозинофилы, %

4,0±1,2

2,7±1,2

ёные, %

0

0,3±0,3

Палочкоядерные, %

1,7±0,3

0,7±0,7

Сегментоядерные, %

51,7±3,4

46,7±1,8

Лимфоциты, %

39,3±3,3

45,7±0,9

Моноциты, %

3,3±0,7

3,7±0,3


Таблица 33. Гематологические показатели кроликов через 14 дней после трехкратного внутривенного введения препарата перфторан по  50 мл/кг.


Показатель, ед. измерения

Препарат

Контроль

Перфторан

Гемоглобин, ммоль/дм3

7,0±0,1

6,8±0,2

Ёритроциты, млн/мм3

3,6±0,2

3,7±0,3

Гематокрит, %

39,1±2,1

38,7±1,7

Ср.объем эритр., мкм3

108,6±2,3

104,6±4,1

Ретикулоциты, %

3,1±0,4

3,0±0,2

Тромбоциты, тыс.

267,2±31,6

275±22

Время свертываемости, с

271±21,3

256±11

СОЁ, мм/час

2,0±0,32

2,2±1,19

Лейкоц., тыс/мм3, в т.ч.:

5,9±0,5

6,1±0,9

Базофилы, %

0

0

Ёозинофилы, %

2,67±1,2

3,33±1,86

ёные, %

0

0

Палочкоядерные, %

1,0±0,0

1,0±0,0

Сегментоядерные, %

54,3±3,2

56,7±3,5

Лимфоциты, %

37,0±1,5

36,0±0,8

Моноциты, %

5,0±1,7

2,7±1,2


Таблица 34. Биохимические показатели мочи кроликов через 24 часа после трехкратного внутривенного введения препарата перфторан по  50 мл/кг.


Исследуемые показатели,

Препарат

единицы измерения

Контроль

Перфторан

Белок, г/л

2,34±0,65

1,95±0,35

Мочевина, ммоль/л

371±106

384±150

Глюкоза, ммоль/л

<6

<6

Калий, г/л

4,34±0,4

4,76,15±1,8

Натрий, г/л

1,1±0,8

3,36±0,9

Уробилиноген, мкмоль/л

<17

<17

рН

6,33±0,53

6,2±0,3

Билирубин, мкмоль/л

<5

<5

Кетоновые тела,ммоль/л

<1

<1


Таблица 35. Биохимические показатели мочи кроликов через 14 дней после трехкратного внутривенного введения препарата перфторан по  50 мл/кг


Исследуемые показатели,

Препарат

единицы измерения

Контроль

Перфторан

Белок, г/л

1,3±0,6

1,43±0,7

Мочевина, ммоль/л

424±140

552±128

Глюкоза, ммоль/л

<6

<6

Калий, г/л

8,04±1,9

8,52±2,1

Натрий, г/л

1,34±0,37

0,93±0,52

Уробилиноген, мкмоль/л

<17

<17

рН

6,67±0,1,2

6,33±0,5

Билирубин, мкмоль/л

<5

<5

Кетоновые тела,ммоль/л

<1

<1


Через 24 часа после последнего введения кроликам перфторана (суммарная доза после трех инфузий составила 150 мл на кг) отмечены изменения в сыворотке крови практически по всем изученным биохимическим показателям (таблица 36). Полученные результаты биохимического исследования сыворотки крови показывают, что препарат при трехкратном  внутривенном введении оказывает влияние на функции почек и печени кроликов. (Следует особо отметить, что после центрифугирования образцов сыворотки крови, взятой через сутки после введения перфторана, примерно половину объема каждого образца составлял четко различимый слой препарата. Поэтому сыворотку крови для анализа отбирали шприцом через иглу из-под слоя перфторана).
Таблица36. Биохимические показатели сыворотки крови кроликов через 24 часа после трехкратного внутривенного введения препарата перфторан по  50 мл/кг


Показатель, ед. измерения

Препарат

Контроль

Перфторан

Общий белок, г/л

62,22±1,56

88,67±8,08*

Глюкоза, ммоль/л

8,47±1,81

8,21±2,45

Мочевина, мкмоль/л

2,05±0,50

13,46±2,25*

Холестерин, ммоль/л

2,83±0,06

5,42±0,25*

Креатинин, мкмоль/л

77,15±4,54

149,77±20,42*

АлАТ, Е/л

9,48±1,85

59,48±14,46*

АсАТ, Е/л

9,71±1,58

26,74±3,49*

Щелочная фосфатаза Е/л

19,38±3,08

68,95±5,34*

Билирубин, мкмоль/л

26,40±2,38

368,07±94,85*



Примечание: знаком * помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных
При исследовании через 14 дней после трех инфузий перфторана в суммарной дозе 150 мл на кг перфторан в сыворотке крови визуально не обнаруживался. Биохимические показатели сыворотки крови кроликов, получавших перфторан, не отличались от таковых у контрольных животных и соответствовали физиологической норме (таблица 37).
Таблица 37. Биохимические показатели сыворотки крови кроликов через 14 дней после трехкратного внутривенного введения препарата перфторан по  50 мл/кг.


Показатель, ед. измерения

Препарат

Контроль

Перфторан

Общий белок, г/л

56,67±1,67

57,50±2,50

Глюкоза, ммоль/л

9,65±0,46

9,47±0,00

Мочевина, мкмоль/л

2,44±0,36

2,12±0,58

Холестерин, ммоль/л

1,21±0,10

1,29±0,09

Креатинин, мкмоль/л

90,77±6,00

88,50±6,81

АлАТ, Е/л

13,19±6,68

14,11±2,78

АсАТ, Е/л

11,88±4,71

9,89±0,54

Щелочная фосфатаза Е/л

17,67±0,74

15,74±0,64

Билирубин, мкмоль/л

20,67±3,03

22,18±4,55



Патологоанатомическое исследование кроликов проводили через 14 дней после трехкратного внутривенного введения препарата перфторан (суммарная доза 150 мл на кг). Патологоанатомическая картина внутренних органов кроликов контрольной группы соответствовала норме. У кроликов, получавших перфторан, отмечены некоторые особенности макроскопической картины. В частности, было установлено увеличение объема и массы легких и селезенки (табл. 38).
Таблица 38. Массовые коэффициенты внутренних органов кроликов через 14 дней после трехкратного внутривенного введения препарата перфторан


Препарат, доза

Сердце

Легкие

Печень

Селезенка

Почки

Перфторан,
по 50 мл/кг трехкратно

4,2 ± 0,3

8,6 ± 0,1*

29,7 ± 5,6

1,2 ± 0,03*

8,6 ± 0,4

Контроль

3,7 ± 1,1

5,1 ± 0,5

30,7 ± 8,2

0,5 ± 0,2

7,6 ± 0,2



Примечание: знаком * помечены значения, достоверно отличающиеся от контрольных При этом легкие были воздушными, бледноЦрозового цвета, с разреза паренхимы стекало небольшое количество пенистой кровянистой жидкости. Края селезенки были притуплены и имели белесый оттенок; соскоб пульпы обильный.

Микроскопическому   исследованию  подвергали   гистологические     препараты легких,  печени, селезенки,  почек и надпочечников. Микроскопическая структура органов животных в контрольной группе соответствовала норме.  Микроскопические изменения в органах  кроликов, получавших  перфторан, имели свои особенности и соответствовали   следующему  описанию.

Легкие имелось резкое истончение межальвеолярных перегородок, значительные эмфизематозные участки. В полости отдельных альвеол находились скопления макрофагов содержащих ПФОС. Печень ¾ отмечалась незначительная инфильтрация паренхимы макрофагами, содержащими ПФОС. Селезенка отмечалось большое количество макрофагов, содержащих ПФОС в красной пульпе, а так же значительное количество моноцитов, эозинофилов и нейтрофильных лейкоцитов. Фолликулы белой  пульпы были уменьшены в размерах и деформированы, очевидно, за счет сдавливания их клетками красной пульпы, содержащими ПФОС. Почки в клубочках коркового вещества кроме форменных элементов крови наблюдались единичные макрофаги, содержащие перфторорганияеские соединения.

Таким образом, внутривенное введение перфторана кроликам вызывало макрофагальную реакцию в паренхиматозных органах. Заключение

Проведено экспериментальное изучение общетоксического действия препарата перфторан на неполовозрелых животных. Перфторан предназначен для использования в качестве кровезаменителя с газотранспортной функцией (ВФС 42-2576-99).

При трехкратном внутривенном введении кроликам в дозе по 50 мл/кг массы тела (суммарная доза 150 мл на кг массы тела) перфторан оказывает влияние на функции печени и почек, вызывая изменение соответствующих биохимических показателей сыворотки крови. Однако эти изменения не сказываются на интегральных показателях клинического состояния животных и являются преходящими, поскольку при исследовании через 14 дней отличия между подопытными и контрольными кроликами отсутствуют. При этом в оба срока исследования отсутствуют изменения в показателях периферической крови и мочи. Морфологическая картина в паренхиматозных органах также не содержит признаков заметного повреждающего действия и характеризуется макрофагальной реакцией. Особенно выражена эта реакция через 14 дней в селезенке, значительные скопления макрофагов в которой депонируют перфторорганические соединения, в определенной степени нарушая микроскопическую картину органа.

При трехкратном внутрибрюшинном введении крысам в дозе 30 мг/кг массы тела (суммарная доза 90 мл на кг массы тела)  ответная реакция организма на перфторан складывается в целом из тех же изменений, что и у кроликов. Основное отличие заключается в том, что изменения биохимических показателей сыворотки крови, будучи несущественными через 24 часа после последнего введения препарата, достигают максимума через 2 недели, а через месяц после введения полностью отсутствуют у самок и незначительны у самцов. И в этом эксперименте также установлена ярко выраженная фагоцитарная активность макрофагов по отношению к перфторану.

При ежедневном внутрибрюшинном введении крысам перфторана в дозе по 50 мл/кг массы тела в течение 14 дней (суммарная доза 700 мл на кг массы тела), характер изменений биохимических показателей сыворотки крови, как и в предыдущих экспериментах, свидетельствовал о влиянии перфторана на функции печени и почек. К тому же, введение препарата в увеличенной дозе в течение длительного срока, вызвало изменение ряда показателей периферической крови. Увеличение таких показателей как гематокрит и средний объем эритроцита, очевидно, связано со специфической газотранспортной функцией перфторана. Повышенное количество лейкоцитов является ответной реакцией на введение большого объема препарата. Следует отметить большее количество изменений в периферической крови самок, чем самцов. При микроскопическом исследовании препаратов внутренних органов, в легких, печени, селезенке, почках, паратрахеальных лимфатических узлах обнаруживается обширная инфильтрация содержащими ПФОС макрофагами. Особенно выражена эта реакция в печени и селезенке. Архитектоника этих органов значительно изменяется за счет деструкции элементов паренхимы, что, в свою очередь, ведет к функциональным изменениям при отсутствии видимых морфологических  изменений в паренхиматозных клетках.

Обобщая результаты проведенных экспериментальных исследований, следует сделать вывод о наличии вызываемых введением перфторана определенных изменений со стороны показателей, характеризующих функции печени и почек. Ёти изменения не оказывают существенного влияния на общее клиническое состояние животных  и являются обратимыми. Морфологические изменения в органах в целом сводятся к различной степени инфильтрации вакуолизированными макрофагами, содержащими перфторорганические соединения Ц компоненты перфторана. Существенным результатом является то, что на протяжении всех экспериментов по многократному введению перфторана, ни одно животное не только не погибло, но и не проявило сколько-нибудь заметных признаков интоксикации.

Считаем, что предлагаемые авторами условия применения препарата перфторан разумны и достаточны с точки зрения соблюдения баланса специфический эффект ‑ безопасность. Однако, при применении перфторана в клинике, следует очень четко определять индивидуально необходимую для пациента дозу и кратность введения препарата. Ёто требование исходит из того, что препарат, введенный в высокой дозе,  способен длительно оставаться в организме, поглощаясь макрофагами, которые, будучи не в состоянии каким-либо образом утилизировать препарат, остаются его пассивными носителями. При возникновении угрозы инфицирования, особенно в первые дни (возможно, и недели) после применения перфторана, макрофагальная система, как одно из звеньев иммунной системы, будет испытывать определенный функциональный дефицит ввиду "загруженности" перфтораном и ослабления в связи с этим фагоцитарной функции. Поэтому следует учитывать как фактор риска при перегрузке организма перфтораном возможное увеличение вероятности развития (или усугубления) инфекционных осложнений и своевременно принимать соответствующие меры.


Страница вверх
Свидетельство о регистрации сетевого электронного научного издания N 077 от 29.11.2006
Журнал основан 16 ноября 2000г.
Выдано Министерством РФ по делам печати, телерадиовещания и средств массовых коммуникаций
(c) Перепечатка материалов сайта Medline.Ru возможна только с письменного разрешения редакции

Размещение рекламы

Rambler's Top100