Федеральное государственное бюджетное учреждение науки
Цель настоящего исследования - выяснить влияние перфторана на выделительную функцию почек в интактном организме, а также в различные стадии токсического поражения почек в опытах на крысах. Методы исследования
Действие перфторана при острой почечной недостаточности (ОПН) исследовано в эксперименте на 50 крысах обоего пола массой 180-250 г, разделенных на 3 группы. Первая группа состояла из интактных животных и служила контролем. После определения фоновых показателей этим крысам вводили перфторан в дозе 5 мл на кг массы тела внутрибрюшинно в течение 3 дней. Вторая группа - животные с глицероловой моделью ОПН. Крысам третьей группы вводили перфторан в дозе 5 мл на кг и через 1 час воспроизводили глицероловую ОПН по методу G. Greven (цит. по [10]). Для моделирования ОПН крыс 2-3 групп выдерживали 24 часа без пищи, после чего внутримышечно вводили 50 % водный раствор глицерола в дозе 10 мл на кг. Затем животных помещали в обменные клетки и собирали мочу в условиях спонтанного диуреза в течение 24 часов. В пробах мочи определяли белок, креатинин, в пробах крови - содержание креатинина. Рассчитывали скорость клубочковой фильтрации (СКФ) и реабсорбцию воды [2]. По отношению объема суточной мочи к количеству выпитой воды оценивали баланс жидкости.
Для выяснения эволюции патологического процесса при глицероловом поражении почек у крыс, в частности, возможности формирования хронической почечной недостаточности (ХПН), была выполнена отдельная серия опытов на 14 животных обоего пола через 2 месяца после введения им глицерола. У этих животных определяли показатели, характеризующие функциональное состояние почек, до и после введения перфторана в дозе 5 мл на кг внутрибрюшинно в течение 5 дней.
Поскольку при почечной недостаточности нередко развивается токсическое поражение центральной нервной системы, оценивали интегральный показатель ее состояния - ориентировочную реакцию по тесту "открытого поля" по методу J.R.Boisser, P.Simon [13] в модификации В.С.Балыниной и Березовской И.В. [1] до и после введения перфторана. При этом регистрировали "норковый рефлекс" - количество заглядываний крыс в отверстия стандартной площадки в течение 3 мин.
Полученные данные
обрабатывали статистически [7]. Для оценки достоверности межгрупповых различий
использовали критерий t Стьюдента, внутригрупповые
различия (до и после экспериментального
воздействия) анализировали по парному критерию Ť Вилкоксона. Различия
считали статистически значимыми при р<0,05. Данные
представлены как среднее ? стандартная ошибка среднего.
Результаты и обсуждение
Результаты исследований показали, что у
интактных крыс перфторан статистически значимо по критерию Т Вилкоксона (в
среднем на 39 %) повышал диурез при неизменной СКФ (табл.1). Следовательно, в
здоровом организме механизм диуретического действия обусловлен только
торможением канальцевой реабсорбции. Питьевая активность животных уменьшалась
на 15% (р<0,05), так что эффективность
почечной экскреции выпитой жидкости существенно возрастала. Полученные
результаты подтверждают данные [4] о способности пефторана оказывать
диуретическое действие.
На модели ОПН опыты выполнены на 2-е сутки,
в полиурической стадии. Перфторан, обладающий собственным умеренным мочегонным
действием, значительно уменьшал полиурию до 3,8?0,6 мл/100 г против 5,7?1,1
мл/100 г у нелеченных крыс и полидипсию (табл.2). Почечные механизмы действия
перфторана обусловлены не только некоторым увеличением СКФ (0,10?0,02 мл/мин с перфтораном
против 0,08?0,01 мл/мин во 2-й группе, в контроле -
0,17?0,02 мл/мин), но и более полной
канальцевой реабсорбцией (96,3?0,6 % с
перфтораном, при 95,3?0,6 % в
группе крыс с моделью ОПН, не получавших препарат). Об эффективности перфторана
на модели ОПН свидетельствует и значительное уменьшение уровня креатининемии (в
среднем на 31% по сравнению с концентрацией креатинина в крови у нелеченных
животных). Показательно также выраженное снижение протеинурии: суточная
экскреция белка у крыс с ОПН, получавших перфторан, уменьшилась в среднем на
36% (табл.2).
При двухнедельном наблюдении за крысами с
ОПН установлено, что перфторан несколько уменьшает летальность (40 % с
перфтораном против 50 % у нелеченных животных).
Опыты, выполненные через 2 месяца после
моделирования глицероловой ОПН, показали, что у крыс сформировалось хроническое
нарушение выделительной функции почек (табл.3). Об этом свидетельствовали
значительное - почти двукратное - снижение СКФ, гиперкреатининемия (концентрация креатинина превышала показатель
интактных животных в среднем в 1,6 раза, р<0,05) и сохраняющаяся протеинурия (суточная экскреция белка
превышала контрольное значение более чем в 3 раза, р<0,01).
Как видно из табл.3, после введения в течение 5 дней перфторана крысам с моделью
ХПН значительно возрос диурез (на 42 %, р<0,01), СКФ возросла до
значений, характерных для интактных животных (0,170?0,014 мл/мин), а протеинурия уменьшилась в среднем на 18% (р<0,01).
Оценка состояния центральной нервной
системы по ориентировочной реакции показала, что у интактных крыс перфторан в
использованной дозе практически не влиял на исследуемый показатель (табл.4). И
в острой, и в хронической стадии экспериментальной почечной недостаточности
происходило выраженное угнетение активности животных - в 2-3 раза уменьшалось
количество обследованных отверстий. На фоне действия перфторана у крыс с
моделью ОПН и через 2 месяца после введения глицерола отмечалось статистически
значимое улучшение ориентировочной реакции в сравнении с показателями нелеченных крыс. Это свидетельствует,
очевидно, о том, что под влиянием перфторана происходит уменьшение токсических
влияний на центральную нервную систему, связанное с улучшением ренальных
функций у животных с почечной недостаточностью.
Резюмируя комплекс полученных данных,
необходимо отметить, что в интактном организме и у крыс с хронической стадией
глицеролового поражения почек перфторан проявляет мочегонное действие, а в
условиях ОПН значительно уменьшает полиурическое действие глицерола. В
различные стадии модельной патологии перфторан оказывает защитное действие,
проявляющееся в улучшении функционального состояния почек, ослаблении
нейроинтоксикации и снижении летальности. Несомненно, ценными свойствами
перфторана являются нормализация сниженной при поражении почек СКФ и антипротеинурический эффект, что связано,
по-видимому, с уменьшением поражения клубочкового аппарата. В механизме
нефропротекторного действия перфторана могут иметь значение его способность улучшать реологические свойства
и микроциркуляцию крови, метаболизм на уровне тканей, а также
мембраностабилизирующее действие кровезаменителя. Представляется перспективным углубленное
исследование механизмов благоприятного влияния перфторана при поражении почек
различной этиологии.
Таблица 1. Влияние перфторана на функциональное состояние почек у интактных крыс
|
Показатель |
Контроль (n = 7) |
Перфторан (n = 7) |
Значимые различия, р |
|
Диурез, мл/100 г за сутки |
1,00?0,28 |
1,39?0,3 |
< 0,05 (Т) |
|
Скорость клубочковой фильтрации, мл/мин |
0,12?0,02 |
0,12?0,02 |
|
|
Относительный диурез, % |
10,5?2,1 |
17,4?1,9 |
< 0,01 |
|
Потребление воды, мл/100 г за сутки |
9,3?1,2 |
7,9?1,0 |
< 0,05 (Т) |
|
Суточная экскреция белка, мг/100 г |
0,19?0,02 |
0,19?0,02 |
|
|
Экскреция креатинина, мкмоль/100 г |
11,1?1,52 |
11,7?1,67 |
|
|
Креатинин крови, мкмоль/л |
72,9?4.3 |
73,2?3,6 |
|
Таблица 2. Влияние перфторана на показатели функционального состояния почек при глицероловой модели ОПН у крыс
|
Показатель |
Контроль (n = 20) |
ОПН (n = 16) |
ОПН+ Перфторан |
Значимые различия, р |
|
Выживаемость, % |
100 |
50 |
60 |
|
|
Суточный диурез, мл/100 г |
1,7?0,3 |
5,7?1,1* |
3,8?0,6 |
|
|
Скорость клубочковой фильтрации, мл/мин |
0,17?0,02 |
0,08?0,01* |
0,10?0,02 |
|
|
Реабсобция воды, % |
98,5?0,3 |
95,3?0,6* |
96,3?0,6 |
|
|
Относительный диурез, % |
16,6?2,2 |
34,9?3,5* |
30,1?4,5 |
|
|
Питьевая активность, мл/100 г |
10,1?0,8 |
14,8?1,3* |
12,5?0,7 |
|
|
Суточная экскреция белка, мг/100г |
0,14?0,02 |
1,19?0,08* |
0,76?0,09 |
< 0,05 |
|
Экскреция креатинина, мкмоль/100 г |
11,1?1,7 |
32,5?4,2* |
19,8?3,2 |
< 0,05 |
|
Креатинин крови, мкмоль/л |
72,9?4,3 |
286,0?20,0* |
197,0?22,0 |
< 0,01 |
Примечание. Звездочка - значимые различия с контролем (p<0,05);
р - статистически значимые различия между крысами с моделью ОПН, получавшими и не получавшими перфторан.
Таблица 3. Ренальные эффекты перфторана у крыс с моделью хронической почечной недостаточности
|
Показатель |
Контроль (n = 20) |
ХПН (n = 14) |
ХПН + перфторан (n = 14) |
р |
|
|
Суточный диурез, мл/100 г |
1,70?0,32 |
1,96?0,26 |
2,79?0,33 |
< 0,01 |
|
|
Скорость клубочковой фильтрации, мл/мин |
0,17?0,02 |
0,09?0,003 * |
0,17?0,02 |
< 0,01 |
|
|
Реабсобция воды, % |
98,5?0,3 |
98,1?0,2 |
98,2?0,3 |
|
|
|
Относительный диурез, % |
16,6?2,2 |
21,4?2,3 |
41,0?5,7 |
< 0,01 |
|
|
Суточное потребление воды, мл/100 г |
10,1?0,8 |
9,6?0,9 |
9,1?1,4 |
|
|
|
Протеинурия, мг/100г |
0,15? | ||||