К СБОРНИКУ МАТЕРИАЛОВ
Харитонова А.В., Бычков Е.Р., Поляков Ю.И., Скулябин Д.И., Дамбинова С.А.
СРАВНЕНИЕ МЕТОДОВ ЛАТЕКС АГГЛЮТИНАЦИИ И ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ АНТИТЕЛ К ОПИАТНЫМ И ГЛУТАМАТНЫМ РЕЦЕПТОРАМ
Институт мозга человека РАН, Санкт-Петербург
Известно, что при различных неврологических заболеваниях наблюдается увеличение уровня аутоантител к рецепторным белкам нервной ткани. Накопление антител к антигенным детерминантам в крови больных может быть определено с помощью различных иммунологических методов, в частности иммуноферментного анализа и реакцией латекс агглютинации.
Целью данного исследования явилась оценка возможности определения аутоантител к опиатным и глутаматным рецепторам в сыворотке крови больных опийной наркоманией и эпилепсией методом латекс агглютинации и сравнение её эффективности с иммуноферментным анализом.
В настоящей работе в качестве сенсибилизирующих агентов были использованы синтетические пептидные фрагменты соответствующие аминокислотным последовательностям опиатных и глутаматных рецепторов. Наибольшая серологическая активность при использовании в качестве антигена синтетического фрагмента мю и дельта опиатных рецепторов наблюдалась при его связывании с частицами полистирола, несущими на своей поверхности карбоксильные группы (диаметр=1,0 мкм). Максимальные титры для GluR1 и NR2A субъединиц глутаматного рецептора выявлялись при их связывании с сополимером полиметилметакрилата с акролеином (диаметр=1,02 мкм), для которого характерно наличие на поверхности частиц слоя, обогащенного гидрофильным сомономером полимерных цепей .
Группа больных, страдающих опийной наркоманией, составила 23 человека, больных эпилепсией - 26 человек. Контрольная группа состояла из 28 здоровых доноров не употребляющих наркотических и седативных средств. Возраст обследованных 16-35 лет.
При сравнении содержания антител к мю и дельта опиатным рецепторам в группах больных опийной наркоманией, эпилепсией и здоровых доноров выявленных методом латекс агглютинации повышенным считали уровень антител в титрах 1:16 и более, который не наблюдался в сыворотках здоровых людей. Группа больных опийной наркоманией отличалась высокой частотой обнаружения повышенного уровня антител к опиатным рецепторам. Уровень антител в титре 1:16 и выше у больных опийной наркоманией регистрировался в 71,0%. Полученные данные свидетельствуют о специфичности выявленных нами изменений уровня антител к мю и дельта опиатным рецепторам у больных опийной наркоманией.
При определении содержания антител к GluR1 субъединице глутаматного рецептора реакцией латекс агглютинации повышенным считался уровень антител в титре 1:32 и выше, так как этот титр наблюдался всего в 7,7% в группе здоровых доноров. Уровень антител к GluR1 субъединице глутаматного рецептора у больных эпилепсией был увеличен в 68,75%, у больных опийной наркоманией повышенный уровень наблюдался в 13,0% случаев. Содержание антител к NR2A субъединице глутаматного рецептора в сыворотке больных опийной наркоманией, эпилепсией и здоровых доноров существенно не отличались между собой. Полученные данные согласуются с более ранними исследованиями, в которых показано увеличение антитела к GluR1 субъединице глутаматного рецептора у больных эпилепсией, которое коррелировало с длительностью и тяжестью заболевания.
Уровень антител к мю и дельта опиатным рецепторам у больных опийной
наркоманией также был определен методом иммуноферментного анализа. В качестве
верхней границы нормальных значений был принят уровень антител,
характеризующийся возрастанием оптической плотности на два стандартных
отклонения от среднего значения в контрольной группе, которой составил 0,39
условных единиц оптической плотности. Показано повышенное содержание антител
у 69% больных. Установлена корреляция между уровнями антител у больных опийной
наркоманией, измеренными с помощью реакции латекс агглютинации и
иммуноферментного анализа (r = 0,77; р < 0,05).
Таким образом, реакцию латекс агглютинации можно рассматривать, как
простой и надежный метод полуколичественного определения аутоантител к
рецепторным белкам нервной ткани, который наряду с иммуноферментным анализом
может быть использован в диагностике ряда неврологических и наркологических
заболеваний.