Медико-биологический
информационный портал
для специалистов
 
БИОМЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ Medline.ru

СОДЕРЖАНИЕ ЖУРНАЛА:
Физико-химическая биология

Клиническая медицина

Профилактическая медицина

Медико-биологические науки


АРХИВ:

Фундаментальные исследования

Организация здравохраниения

История медицины и биологии



Последние публикации

Поиск публикаций

Articles

Архив :  2000 г.  2001 г.  2002 г. 
               2003 г.  2004 г.  2005 г. 
               2006 г.  2007 г.  2008 г. 
               2009 г.  2010 г.  2011 г. 
               2012 г.  2013 г.  2014 г. 
               2015 г.  2016 г. 

Редакционная информация:
        Опубликовать статью
        Наша статистика


 РЕДАКЦИЯ:
Главный редактор

Заместители главного редактора

Члены редколлегии
Специализированные редколлегии


 УЧРЕДИТЕЛИ:
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки
"Институт токсикологии Федерального медико-биологического агентства"
(ФГБУН ИТ ФМБА России)

Институт теоретической и экспериментальной биофизики Российской академии наук.

ООО "ИЦ КОМКОН".




Адрес редакции и реквизиты

199406, Санкт-Петербург, ул.Гаванская, д. 49, корп.2

ISSN 1999-6314

Российская поисковая система
Искать: 


ТОМ 2, СТ. 46 (стр. 218-220) // Ноябрь, 2001 г.

ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА Т-КЛЕТОЧНОГО ПРОЛИМФОЦИТАРНОГО ЛЕЙКОЗА

Е.Е.Зуева, Л.С.Миронова, И.В.Молчанова, Е.Р.Мачюлайтене, Г.Н.Салогуб, А.Ю.Зарицкий, Ю.А.Криволапов*
zu@lci.mu.spb.ru
Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им.акад.И.П.Павлова
*Областная клиническая больница



Т-пролимфоцитарный лейкоз (Т-ПЛЛ) является редкой патологией, впервые подробно описанной в начале 80-х годов ХХ века. К 1998 году в литературе известно всего 135 случаев. Основной контингент больных с верифицированным диагнозом Т-ПЛЛ - это мужчины средней и старшей возрастных групп с выраженной гепатоспленомегалией и нередко специфическим поражением кожи. При лабораторном исследовании обычно выявляется выраженный лимфоцитоз и тромбоцитопения, часто сопровождающаяся анемией. Заболевание отличается агрессивным течением, по некоторым данным медиана выживемости составляет 7 месяцев (1).
Представлены данные проспективного наблюдения больного К-ва 50 лет, поступившего в гематологическое отделение СПбГМУ им.акад.И.П.Павлова в феврале 2001 года в связи с выраженным лейкоцитозом. При физикальном обследовании выявлена выраженная гепатомегалия (+16 см), спленомегалия, увеличение аксиллярных и паховых л/узлов (+4 см). При лабораторном обследовании выявлен выраженный лимфоцитоз (225 х 109/л) при сохранном уровне тромбоцитов (140 х 109/л). На основании данных гистологии, иммуногистохимии, цитологии, иммуноцитохимии и проточной цитометрии установлен диагноз Т-клеточной пролимфоцитарной лимфомы с редким фенотипом CD3+CD4+CD8+. Кариотип опухолевых клеток нормальный (46ХУ).
Морфологически лимфоциты периферической крови небольшого и среднего размера с относительно крупным кругло-овальным ядром, в основном неправильной формы с высоким ядерно-цитоплазматическим соотношением.
Картина костного мозга практически идентична: высокая клеточность, гранулопоэз сужен, эритропоэз практически не представлен, основная масса клеток - измененные лимфоциты. Мегакариоцитов мало, с отшнуровкой.
При гистологическом исследовании ткани лимфатического узла выявлено практически полное замещение собственно ткани л/узла монотононым пролифератом из мелких угловатых клеток, с неправильной формы ядрами.
Выделение мононуклеаров для иммуноцитохимического выявления поверхностных маркеров лимфоцитов проводили с использованием градиента плотности LSM (lympho separation medium, ICN Biomedicals, Inc) (2). Иммуногистохимический анализ л/у и иммуноцитохимический анализ цитологических препаратов был осуществлен с использованием специфических поликлональных антител к CD3 и моноклональных антител (МКА) к CD3 (UCHT1), CD5 (4C7), CD4 (MT310), CD8 (DK25), CD20 (В-Lу1), CD79a (JCB117), CD22 (4KB128), CD45RO (UCHL) производства DAKO (Denmark). Пролиферативную активность клеток оценивали с помощью МКА к cyclin D1 (DCS-6, DAKO) и специфических поликлональных антител к Ki-67 (DAKO). Для реализации стрептавидин-биотинового метода применена системы визуализаци LSAB+ DAKO (Denmark) согласно опубликованной ранее методике (2).
По данным иммуногистохимического исследования клетки лимфомы характеризовались выраженной мембранной экспрессией СD3, умеренной мембранной экспрессией CD5 и цитоплазматической экспрессией cyclin'a D1. Опухолевые клетки не экспрессировали CD20, CD45RO) , CD79, CD23. Пролиферативная активность (Ki-67) была низкая.
При иммуноцитохимическом исследовании препаратов периферической крови и костного мозга выявлено абсолютное преобладание Т-лимфоцитов клеток зрелого фенотипа CD3+, CD4+, CD8+ и практически полное отсутствие В-лимфоцитов (СD20+ и CD22+).
Для определения характера сочетанной экспрессии выявленных маркеров проведено исследование клеток периферической крови, костного мозга и ликвора методом проточной цитометрии как до, так и после полихимиотерапии (ПХТ). Подготовка образцов периферической крови и костного мозга к исследованию была проведена двумя методами: 1. Методом градиентного центрифугирования получена суспензия мононуклеаров, концентрация клеток в которой составляла 900-1.200х103/мм3. Инкубация с флуорохром-мечеными антилейкоцитарными МКА продолжалась10 минут при комнатной температуре в темноте. Затем в каждую пробирку вносили 1 мл FACS Flow (BD, San Jose, CA, USA), после чего образец был готов к исследованию.
Страница 218вверх (Иммунология)

2. Второй вид пробоподготовки был проведен по протоколоу окрашивание-лизис-отмывка: периферическая кровь или костный мозг (по 100 мкл) инкубировали в течение 15 минут (при комнатной температуре в темноте) с тремя комбинациями антител, соединенных с различными флуорохромами. Затем в каждую пробирку было внесено 2 мл FACS lysing solution (Becton Dickinson (BD), San Jose, CA, USA), разведенного 1/10 дистиллированной водой. Длительность инкубации составила 10 мин (при комнатной температуре в темноте). Отмывка осуществлялась методом центрифугирования при 500 g/мин (5 мин) в растворе FACS Flow (BD, San Jose, CA, USA). После удаления надосадочной жидкости вновь внесен 1 мл FACS Flow, после чего образец был готов к исследованию.
Использована следующая панель флуорохром-меченых МКА: CD3-FITC, CD4-PE, CD8-RPE-Cy5, CD19-PE, CD16-PE, CD45-RPE-Cy5 (DAKO Denmark).

Стандартизция процедуры и контроль качества.
Процедура настройки прибора и контроль качества его работы осуществлен службой сервиса российского представителя BD фирмой Bioline. Характеристики светорассеяния и аутофлюоресценции нормальных лимфоцитов периферической крови были использованы как референсные показатели для настройки прибора. Анализ проведен с помощью програмного обеспечения Flomax фирмы DAKO (Denmark). Для контроля качества исследования проведено тройное окрашивание нормальных лимфоцитов периферической крови с использованием CD3-FITC/CD4-PE/CD8-RPE-Cy5.

Результаты и их интерпретация.
При обоих способах подготовки проб получены идентичны результаты.
При первичном обследовании (до ПХТ) как в периферической крови, так и в костном мозге выявлена популяции CD3+CD4+CD8+ клеток (рис.1), что при сочетанном анализе морфологических и фенотипических данных позволило верифицировать иммунофенотипически редкий вариант Т пролимфоцитарного лейкоза (табл.1).
Иммунофенотипическая характеристика лейкозных клеток периферической крови больного К-ва до ПХТ

Таблица 1
Фенотипические маркеры Относительное содержание положительных клеток (%)
CD8+CD4+CD3+ 83,43
CD8-CD3+ 6,94
CD8+CD4- 7,20
CD8-CD4+ 6,98
CD4-CD3+ Не определяется
CD3-CD19+ Не определяется
CD16+CD45+ 1,8


После проведения первого курса ПХТ (CHOP) при исследовании методом проточной цитометрии (рис.2) не выявлены изменения в содержании опухолевых клеток в периферическй крови и костном мозге (табл.2).
Иммунофенотипическая характеристика клеток периферической крови и костного мозга больного К-ва после ПХТ

Таблица 2
Фенотипические маркеры Относительное содержание положительных клеток (%)
Периферическая кровь Костный мозг
CD8+CD4+CD3+ 90,31 84,91
CD8-CD3+ 8,16 9,30
CD8+CD4- Не определяется 1,87
CD8-CD4+ 8,06 8,80
CD4-CD3+ Не определяется  
CD3-CD19+    
CD16+CD45+    


После проведениия ПХТ получена клинико-гематологическая ремиссия, однако через 4,5 месяца больной поступает в клинику повторно с картиной менингоэнцефалита. При исследовании спинномозговой жидкости выявлен лимфоцитоз до 473/3 с преобладающим фенотипом клеток CD5+CD3+CD4+CD8+, сохраняющимся в ликворе, несмотря на проведение интенсивной ХТ.
В последующем получена положительная динамика неврологической симптоматики. По данным компьютерной томографии головного мозга очаговые поражения не определяются. Проявления основного заболевания отмечены в виде периферической умеренной лимфоаденопатии и абсолютного лимфоцитоза (185х109/л) в периферической крови.

Сопоставление фенотипических характеристик клеток, составляющих основной сусбтрат опухоли с данными литературы, описывающей Т-пролимфоцитарный лейкоз выявило совпадение основных иммунофенотипических характеристик Т-клеточного пролимфоцитарного лейкоза (табл. 3)

Страница 219вверх (Иммунология)

Фенотипическая характеристика Т-клеточного пролимфоцитарного лейкоза по данным иммуногистохимии и проточной цитометрии

Таблица 3
Общая характеристика фенотипа Т-ПЛЛ Наш пациент Зрелый посттимический фенотип + CD1a - - TdT - - CD2 + + CD5 + + CD7 + в большинстве случаев mCD3 + в 80% случаев + cyCD3 + в 20% случаев - CD4+CD8- в 61% случаев - CD4+CD8- реже, в 25% случаев - CD4-CD8+ + в 11% случаев - NK cells CD16+CD56+ - -

Заключение
Т-клеточный пролимфоцитарный лейкоз, двойной позитивный вариант CD3+CD4+CD8+.

Литература:
1. Matutes E. T-cell Prolymphocytic Leukemia. Cancer Control 1998, 5(1):19-24.
2. Тотолян А.А., Балдуева И.А., Бубнова Л.Н., Закревская А.В., Зуева Е.Е., Калинина Н.М., Лисицина З.Н. Стандартизация методов иммунофенотипирования клеток крови и костного мозга человека. Медицинская иммунология, 1999, т.1., © 5, с.21-43
3. Lavabre-Bertrand T. Flow-cytometric quantitation in chronic leukemia. Eur J Histochem 1996: 40 Suppl 1:33-38.
4. Mizuki M, Tagawa S, Machii T, Shibano M, Tatsumi E, Tsubaki K, Tako H, Yokohama A, Satou S, Nojima T, Hirota T, Kitani T. Phenotypical heterogeneity of CD4+CD8+ double-positive chronic T lymphoid leukemia. Leukemia 1998, 12(4):499-504.
5. Obara N, Ohkoshi Y, Komeno T, Hasegawa Y, Kojima H, Ninomij\ya H, Nagasawa T. T-cell prolymphocytic leukemia with CD4+CD8+CD25+ phenotype in a patient presenting with venous thrombosis in the lower leg. Rinsho Ketsueki 1999, 40(11):1187-92.
6. Roth G., Schmitz G: Consensus protocol for the flow cytometric immunophenotyping of hematopoietic malignancies. Working group of flow cytometry and image analysis. Leukemia10: 877-895, 1996.
7. Weisberg J, Wu CD, Liu Z, Wong JY, Melamed MR, Gorczyca W. Differential diagnosis of malignant lymphomas and related disorders by specific pattern of expression of immunophenotypic markers revealed by multiparameetr flow cytometry (review). Int J Oncol 2000, 17(6):1165-77.
8. Zuckermann FA. Extratymic CD4/CD8 double positive T cells. Vet Immunol Immunopathol 1999, 15; 72(1-2):55-66.

Страница 220вверх (Иммунология)
Свидетельство о регистрации сетевого электронного научного издания N 077 от 29.11.2006
Журнал основан 16 ноября 2000г.
Выдано Министерством РФ по делам печати, телерадиовещания и средств массовых коммуникаций
(c) Перепечатка материалов сайта Medline.Ru возможна только с письменного разрешения редакции

Размещение рекламы

Rambler's Top100