Масс-спектрометрическая идентификация аддуктов бутирилхолинэстеразы с фосфорорганическими соединениями с помощью концентрирования иммунопреципитацией из плазмы крови Medline.ru - медико-биологический информационный портал Медлайн.ру

Масс-спектрометрическая идентификация аддуктов бутирилхолинэстеразы с фосфорорганическими соединениями с помощью концентрирования иммунопреципитацией из плазмы крови

Дубровский Я.А.1, Мурашко Е.А.1, Бельтюков П.П.1, Подольская Е.П.2,3,
Бабаков В.Н.1

1- НИИ гигиены, профпатологии и экологии человека ФМБА России, Санкт-Петербург, Россия
2-Институт аналитического приборостроения РАН, Санкт-Петербург, Россия
3- Институт токсикологии ФМБА России, Санкт-Петербург, Россия

Резюме
В работе предложены методы пробоподготовки и масс-спектрометрической идентификации модифицированных фосфорорганическими соединениями (на примере российского Vx) пептидов активного центра бутирилхолинэстеразы. Предлагаемые подходы позволяют определять факт контакта с веществом типа Vx в биопробах с пределом обнаружения менее 1 нг/мл в плазме крови (по аддукту с БХЭ) и при менее 5 % ингибировании БХЭ.

Ключевые слова
бутирилхолинэстераза, фосфорорганические соединения, аддукт, иммунопреципитация, VX, VR.

(статья в формате PDF. Для просмотра необходим Adobe Acrobat Reader)

открыть статью в

новом окне

Список литературы

1. Kim J.H., Stevens R.C., MacCoss M.J., Goodlett D.R., Scherl A., Richer R.J., Suzuki S.M., Furlong C.E. Identification and characterization of biomarkers of organophosphorous exposures in humans. // Adv Exp Med Biol. – 2010. – V. 660. – P. 61-71.

2. Read R.W., Riches J.R., Stevens J.A., Stubbs S.J., Black R.M. Biomarkers of organophosphorus nerve agent exposure: comparison of phosphylated butyrylcholinesterase and phosphylated albumin after oxime therapy.// Arch.Toxicol. – 2010. – V.84. – P. 25-36.

3. Marsillach J., Richer R.J., Kim J.H.,Stevens R.C., MacCoss M.J., Tomazela D., Suzuki S.M., Schopfer L.M., Lockridge O., Furlong C.E. Biomarkers of organophosphorous exposures in humans // Neurotoxicology. – 2011. – V.32 (5). – P. 656-660.

4. Li H., L.M. Schopfer, F. Nachon, M.T. Froment, P. Masson, O. Lockridge Aging pathways for organophosphate-inhibited human butyrylcholinesterase, including novel pathways for isomalathion, resolved by mass spectrometry // Toxicological Sciences. – 2007. – V. 100. – P. 136–145.

5. Gomez J.L., Nieto-Ceron S., Campoy F.J., Mundoz-Delgado E., Vidal C.J. Purification and properties of hydrophilic dimers of acetylcholinesterase from mouse erythrocytes. // The International Journal of Biochemistry and Cell Biology. – 2003. – V.35. – P. 1109-1118.

6. Lockridge O., Schopfer L. M., Winger G., Woods J. H. Large scale purification of butyrylcholinesterse from human plasma suitable for injection into monkeys; a potential new therapeutic for protection against cocain and nerve agent toxicity // J. Med.Chem. Boil. Radiol Def. – 2005. – 3 nihms5095 – PMID: 16788731 – PMCID: PMC1480358.

7. Li H., Tong L., Schopfer L.M., Masson P., Lockridge O. Fast affinity purification coupled with mass spectrometyr for identification organophosphate labeled plasma butyrylcholinesterse // Chem. Biol. Interact. – 2008. – V. 175. – P. 68-72.

8. Li B., I. Ricodel, L.M. Schopfer, F. Baud, B. Megarbane, P. Masson, O. Lockridge. Dichlorvos, chlorpyrifos oxon, aldicarb adducts of butyrylcholiesterase, detected by mass spectrometry, in human plasma following deliberate overdose. // J. Appl Toxicol. – 2010. – V.30. – №6. – P. 559-565.

9. Мурашко Е.А., Дубровский Я.А., Подольская Е.П., Бабаков В.Н. Идентификация аддуктов фосфорорганических отравляющих веществ методами фосфопротеомики // Медицинский академический журнал. – 2012. – Т. 12. – № 3. – С. 77-79.

10. Sporty J.L.S., S.W. Lemire, E.M. Jakubovski, J.A. Renner, R.A. Evans, R.F. Williams, J.G. Schmidt, M.J. vander Schans, D. Noort, R.C. Johnson. Immunomagnetic separation and quantification of butyrylcholinesterase nerve agent adducts in human serum. // Anal.Chem. – 2010. – V.82. – P. 6593-6600.

11. Marsillach J., Costa L.G., Furlong C.E. Protein adducts as biomarkers of exposure to organophosphorus compounds. // Toxicology. – 2013. – V. 307. – P. 46-54.

12. Domanski M, Molloy K, Jiang H, Chait BT, Rout MP, Jensen TH, LaCava J. Improved methodology for the affinity isolation of human protein complexes expressed at near endogenous levels. // Biotechniques. – 2012 – P.1-6. – doi:10.2144/000113864. – PubMed PMID: 22668517.