Медико-биологический
информационный портал
для специалистов
 
БИОМЕДИЦИНСКИЙ ЖУРНАЛ Medline.ru

СОДЕРЖАНИЕ ЖУРНАЛА:
Физико-химическая биология

Клиническая медицина

Профилактическая медицина

Медико-биологические науки


АРХИВ:

Фундаментальные исследования

Организация здравохраниения

История медицины и биологии



Последние публикации

Поиск публикаций

Articles

Архив :  2000 г.  2001 г.  2002 г. 
               2003 г.  2004 г.  2005 г. 
               2006 г.  2007 г.  2008 г. 
               2009 г.  2010 г.  2011 г. 
               2012 г.  2013 г.  2014 г. 
               2015 г.  2016 г. 

Редакционная информация:
        Опубликовать статью
        Наша статистика


 РЕДАКЦИЯ:
Главный редактор

Заместители главного редактора

Члены редколлегии
Специализированные редколлегии


 УЧРЕДИТЕЛИ:
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки
"Институт токсикологии Федерального медико-биологического агентства"
(ФГБУН ИТ ФМБА России)

Институт теоретической и экспериментальной биофизики Российской академии наук.

ООО "ИЦ КОМКОН".




Адрес редакции и реквизиты

199406, Санкт-Петербург, ул.Гаванская, д. 49, корп.2

ISSN 1999-6314

Российская поисковая система
Искать: 


«
ТОМ 12, СТ. 89 (стр. 1101-1118)   |   15 октября 2011 г.   
»

Фундаментальные исследования » Биофизика

Новый метод получения высокоочищенного белка p32 бактериофага т4 для биомедицинских исследований
Н.В. Зырина, Л.А.Железная, И.В. Свадьбина, Н.И. Матвиенко*

Учреждение Российской академии наук Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН, 142290 г. Пущино Московской обл., ул. Институтская, 3, тел. (495) 632-78-69. E-mail: office@iteb.ru

*- Учреждение Российской академии наук Институт белка РАН, 142290, г. Пущино Московской обл. Институтская, 4,



Резюме

В настоящее время для биомедицинских исследований широко используются различные методы амплификации нуклеиновых кислот. Однако при амплификации ДНК часто возникает проблема появления неспецифических продуктов. Применение в реакциях амплификации ДНК белков, связывающихся с оцДНК (белков SSB - single-stranded DNA binding) бактериофага T4 и E.coli, часто приводит к решению этой проблемы. В связи с этим актуальной является задача получения высокоочищенных препаратов SSB белков, свободных от примесей ДНК и нуклеаз. Мы разработали новый метод получения высокоочищенного белка SSB (T4gp32) из сконструированного нами штамма-суперпродуцента. Особенностью разработанного нами метода выделения белка T4gp32 является обработка клеточного лизата спермином для освобождения препарата от примесей нуклеиновых кислот и применение на последующих этапах очистки белка хроматографией на гепарин-сефарозе, что позволило получить препарат с чистотой более 99% свободный от экзо-и эндонуклеазных активностей.


Ключевые слова

неспецифическая амплификация ДНК, выделение рекомбинантного белка T4gp32





(статья в формате PDF. Для просмотра необходим Adobe Acrobat Reader)



открыть статью в новом окне

Список литературы

1 Walker G.T., Linn C.P. // Clin. Chem. 1996. V. 42. P. 1604-1608.


2 Lizardi P.М., Huang X., Zhu, Z., Bray-Ward P., Thoмas D. C., Ward D. C. // Nature Genetics 1998. V. 19. P. 225-232.


3 Vincent M., Xu Y., Кong H. // EМBO report. 2004 V. 5. P. 795 - 800.


4 Tan E., Erwin B., Dames, S., Voelkerding K., Niemz A. // Clin. Chem. 2007. V. 53. P. 2017- 2020.


5 Chou Q., Russell M., Birch D.E., Raymond J., Bloch W. // Nucl. Acids Res. 1992. V. 20. P. 1717–1723.


6 Inoe J., Shigemore Y., Mikava T. // Nucl. Acids Res. 2006. V. 34. e69.


7 Schwarz K., Hansen-Hagge T., Bartram C. // Nucl. Acids Res. 1990. V. 18. P. 1079-1080.


8 Sandhu D.K., Keohavong P. // Gene. 1994. V. 144. P. 53-58.


9 Villalva C., Touriol C., Seurat P., Delsol G., Brousset P. // BioTechniques. 2001. V. 31. P. 81- 86.


10 Alberts, B., Frey, L. // Nature. 1970. V. 227. P.1313 – 1318.


11 Bittner, М., Bruce, R. L, Alberts, B. М. // J. Biol. Chem. 1979.V. 254. P. 9565 – 9572.


12 Price, P. A., Lin T-Y., Stain, W., H., Мoore, S. // J. Biol. Chem. 1969. V. 244. P. 917 – 923.


13 Hosodа J., Taкacs B., Bracк C. // FEBS lett. 1974. V. 47. P. 338 – 342.


14 Мoise H., Hosodа J. // Nature. 1976. V. 259. P. 455 – 458.


15 De Walt B. W., Мurphy J. C., Fox G. E., Willson R. C. // Protein Expression and Purification. 2003. V. 28. P. 220 – 223.


16 Sellmann E., Schroder K-L., Knoblich I-M., Westermann P. // J. Bacteriol. 1992. V. 174. P. 4350-4355.


17 Матвиенко Н. Н., Крамаров В. М., Железная Л. А., Матвиенко Н. И. // Биохимия. 1993. V. 58. P. 1137-1149.


18 Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование: Пер. с англ. М.: Мир, 1984. (Maniatis T., Fritsch E.E., Sambrook J. Molecular cloning. A laboratory manual. Cold spring harbor laboratory, 1982.)


19 Laemmli U. R. // Nature. 1970. V. 227. P. 680-685.


20 Кrisch H. М., Selzer G. B. // J. Мol. Biol. 1981. V. 148. P. 199 – 218.


21 Shamoo Y., Adаri H., Кonigsberg W. H., Wiliams К. R. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986. V. 83. P. 8844 – 8848.


22 Novagen. pET Мanual. TB055, 10th edition 2002.


23 von Hippel P.H., Кowalczyкowsкi S. C., Lonberg N., Newport J. W., Paul L. // J. Мol. Biol. 1982. V. 162. P. 795 – 818.


24 Welker E., Varadi A. // Biochem. and Biophys. Research Communications. 2000. V. 271. P. 534-536.



Свидетельство о регистрации сетевого электронного научного издания N 077 от 29.11.2006
Журнал основан 16 ноября 2000г.
Выдано Министерством РФ по делам печати, телерадиовещания и средств массовых коммуникаций
(c) Перепечатка материалов сайта Medline.Ru возможна только с письменного разрешения редакции

Размещение рекламы

Rambler's Top100